OSN-SAbstraktOSN-E

Kvantitativní stanovení koncentrace glukózy v séru, krvi, plazmě, případně moči na analyzátoru

Biosen C-line Clinic enzymatickou metodou.

 

Seznam souvisejících dokumentů

Laboratorní příručka

Příručka kvality

Provozní řád

S-OKBH-004 Směrnice pro IKK - OKBH

S-OKBH-005 Směrnice EHK

PI-OKBH-22 Manuál analyzátoru Biosen

SOPT_Glukozový analyzátor Biosen C - line

F-OKBH-020 Kontrola  glu senzoru

F-OKBH-031 Harmonogram kontrol na Biosenu

Uživatelský manuál pro analyzátor Biosen C-Line Clinic/GP+

Příbalový leták konkrétního používaného tekutého kontrolního materiálu společnosti Biorad

Příbalový leták kalibrátoru pro hemolyzát EKF Diagnostic                  

 

OSN-SKódy, názvy, definice a terminologie

Glykémie v hemolyzátu, GLU, GLC, Glykémie, D-glukóza, α-D-glukopyranoza

 

Reagencie Biosen C-Line Clinic/GP+: Systémový roztok pro analyzátory glukózy Ebio a Biosen

Název v lokálním číselníku LIS: H_Glukóza (viz. LIS OKBH VN)

Klíč v lokálním číselníku LIS: GLU 1 až GLU 24

Číslo metody v lokálním číselníku LIS: 410 až 433

Kód metody pro analyzátor Biosen: 001

Kód metody v analyzátoru cobas c501: není on-line (pouze záloha)

Seznam zdravotních výkonů MZ ČR: 81155 Glukóza STATIM

                                                        81439 Glukóza

 

Záložní metoda pro stanovení hemolyzovaných kapilárních vzorků krve na analyzátoru cobas c501:

Reagenční souprava: ROCHE GLUC3, REF: 04404483190

Název metody ve statimovém analyzátoru cobas c 501: GLHSTAT

 

OSN-SPrincip

Elektrochemický, kombinovaný s čipovou technologií. Enzymy imobilizované na čipu (glukózaoxidáza) katalyzují oxidaci glukózy na kyselinu glukonovou a peroxid vodíku, který je elektrochemicky detekován na měřící elektrodě. Protékající proud je úměrný koncentraci glukózy ve vzorku. Koncentrace glukózy ve vzorku je stanovena porovnáním signálu neznámého vzorku se známou koncentrací.

OSN-E

OSN-SMísto provádění postupuOSN-E

OKBH, úsek biochemický, Nemocnice AGEL Ostrava - Vítkovice a.s., Zalužanského 1192/15, 703 84 Ostrava-Vítkovice

  

OSN-SBezpečnostní aspektyOSN-E

Je nutné dodržovat obecné zásady bezpečnosti práce podle ČSN 01 8003, ale i zásady práce s biologickým materiálem, který může být zdrojem přenosu některých infekcí. Zejména je třeba zachovávat pravidla osobní hygieny, používat osobní ochranné pracovní prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci nejíst, nepít a nekouřit. Po práci a před jídlem omýt pokožku především rukou teplou vodou a mýdlem a ošetřit vhodným reparačním krémem. Při zasažení očí vymývat velkým množstvím vlažné vody nejméně 15 minut. Při zasažení oděvu a kůže odložit veškeré kontaminované oblečení. Okamžitě kůži omýt velkým množstvím, pokud možno vlažné vody, popř. mýdlem nebo jiným vhodným mycím prostředkem. Po umytí ošetřit vhodným reparačním krémem. Při náhodném požití vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru vody a vyhledat lékařskou pomoc.

  

OSN-SFáze před vyšetřením

Pro relevantnost výsledku je nezbytné znát časový údaj mezi odběrem krve a posledním jídlem. 

Vzhledem k nestabilitě glukózy by se měl provádět odběr do zkumavek s antiglykolytickými přísadami. Není-li použita antiglykolytická přísada, klesá bez oddělení krevních elementů koncentrace glukózy při teplotě 20 až 25 °C o 0,275 až 0,55 mmol/l za hodinu, což činí asi 5-7 %.

Glukóza je, vedle vyšších mastných kyselin, nejdůležitějším zdrojem energie pro organismus. Do organismu se glukóza dostává potravou po rozštěpení cukrů v gastrointestinálním traktu. Vstřebává se do krve a tkání (játra, svaly, tuková a mozková tkáň), kde se buď využívá jako přímý zdroj energie, nebo se ukládá do zásoby ve formě glykogenu. Poločas katabolismu glukózy je cca 20 minut. Plynulá dodávka správná utilizace glukózy je pro organismus velmi důležitá, protože zásoba glykogenu postačí jen na krátkou dobu. Nedostatek glukózy je kritický zvlášť pro buňky, které nedovedou využít jiný zdroj energie (například erytrocyty). Při nedostatku glukózy dochází k její tvorbě z nesacharidových prekurzorů (aminokyseliny, glycerol, laktát). Metabolismus glukózy je řízen celou řadou regulačních systémů. Pankreatický inzulin podporuje utilizaci glukózy, katecholaminy potlačují sekreci inzulinu, glukagon podporuje uvolňování glukózy z glykogenu (glykogenolýza). Porušením rovnováhy těchto regulačních mechanizmů může způsobit trvalou hyper nebo hypoglykémii a snížení tolerance na zátěž glukózou.

Indikací pro vyšetření glukózy v krvi je především:

·         screeningové vyhledávání diabetes mellitus

·         upřesnění diagnostiky diabetes mellitus

·         kontrola účinnosti léčby

Vyšetřování glukózy v moči slouží jako hrubý indikátor ztrát glukózy. Snížení hladiny svědčí o bakteriální infekci (obdobně v likvoru).

 

OSN-SOdběr primárního vzorku a transportOSN-E

Odběr

Sérum: Odběr se provádí standardním způsobem ze žilní krve, do plastové zkumavky s aktivátorem srážení nebo se separačním gelem za použití uzavřeného odběrového systému. Speciální příprava pacienta ani dieta není nutná, pro obvyklé vyšetřování je vhodný odběr ráno.

 

Plazma: Li-heparin, K3-EDTA s NAF

Nejvhodnější odběr je EDTA plazma s NaF. Tento odběr se vždy provádí, jestliže je u pacienta požadován orální glukózo-toleranční test. PI-OKBH-07 Provedení o-GTT

 

Moč: Pro stanovení v moči se doporučuje odběr 24 hodinového vzorku moče bez přídavku konzervačních činidel. Je nutné změřit celkový objem moče s přesností na 10 ml a po dokonalém promíchání, odlít vzorek do vhodné odběrové nádoby a co nejrychleji

donést do laboratoře. 

 

Likvor: Odběr do polystyrenu bez úprav - zpracovat co nejrychleji, centrifugovat do 1 hodiny po odběru.

 

Stabilizovaný hemolyzát:

Provádí se z prstu do 20 ul kalibrované kapiláry potažené heparinem (nesrážlivá kapilární krev), která se ihned vloží do mikrozkumavky Eppendorf s hemolyzačním činidlem (1 ml). Mikrozkumavka se uzavře a dobře promíchá (kapilára musí být celá naplněná krví a bez bublin).

 

Odběr do kepu (glykemické profily, kdy si pacienti provádějí odběry sami doma):

Provádí se z prstu do kepu s Glukofixem (směs EDTA a NaF). Do kepu se kápnou 3 kapky krve

přímo z prstu, kep se uzavře, dobře promíchá a označí se jménem a časem odběru.

 

 

Při odběru primárního vzorku se postupuje podle pracovní instrukce PI-OKBH-19 Odběr vzorku.

 

Transport

Transport materiálu na oddělení OKBH VTN je popsán ve směrnici S-OKBH-006 Směrnice pro transport a příjem vzorků.

Skladování

Sérum/plazma je na OKBH po provedení analýzy skladováno v lednici při +2 až + 8°C po dobu 2 dnů pro potřeby dodatečně požadovaných vyšetření. Doba dodatečně požadovaných vyšetření se řídí podle seznamu uvedeném v  LP C-03 Ústní požadavky na vyšetření.

Moč je po provedení analýzy a zkontrolování výsledků likvidována.

Likvor je skladován po provedení analýz a zkontrolování výsledků 30 dní v ledničce pouze pro identifikaci materiálu. Výjimečně, v případě delšího skladování pro potřebu analýzy, je likvor skladován zamražená při teplotě -20°C po dobu maximálně 6 měsíců.

Hemolyzát je po provedení analýzy a zkontrolování výsledků likvidován.

 

Interference sérum/plazma

Stanovení neovlivňuje hemolýza (koncentrace hemoglobinu < 10,0 g/l),  lipémie (< 11,3 g/l intralipidu), iktérie  (koncentrace bilirubinu < 514 µmol/l)

 

Interference moč

Stanovení neovlivňuje salicylát (sodná sůl)< 3,6mmol/l), kys. askorbová koncentrace

<11,4 mmol/l), kofein koncentrace <2,6 mmol/l, kreatinin koncentrace <44,2 mmol/l, močovina <83,3 mmol/l.

Stabilita měřené veličiny v séru podle Encyklopedie laboratorní medicíny pro klinickou praxi (SEKK)

+20 až +25°C: 1 den, +2 až +8°C: 7 dní, -20°C: 24 hodin, zamrazit pouze jednou, nerozmrazovat při vysoké teplotě.

Stabilita měřené veličiny v moči podle Encyklopedie laboratorní medicíny pro klinickou praxi (SEKK)

+20 až +25°C: 2 hodiny

Stabilita měřené veličiny v hemolyzátu podle Encyklopedie laboratorní medicíny pro klinickou praxi (SEKK)

+20 až +25°C: 2 dny, +2 až +8°C: 7 dní

Stabilita měřené veličiny v likvoru podle Encyklopedie laboratorní medicíny pro klinickou praxi (SEKK)          zpracovat ihned

 

OSN-SOmezeníOSN-E

Laboratoř může odmítnout přijetí materiálu a neprovést požadované vyšetření z obecných důvodů uvedených v Laboratorní příručce v kapitole kritéria pro přijetí nebo odmítnutí primárních vzorků.

 

OSN-SManipulace se vzorkyOSN-E

Manipulace se vzorky probíhá podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem uvedených v Laboratorní příručce a Příručce kvality.

Primární zkumavka s biologickým materiálem je centrifugována 10 minut při rychlosti 2000 ot/min. Po centrifugaci je odeslána k analýze. Vzorky obsahující sraženinu musí být před analýzou opět centrifugovány. 

OSN-E

OSN-SPřístroje a pomůckyOSN-E

Centrifuga

Analyzátor Biosen C-line Clinic

pipety

 

OSN-SReagencieOSN-E

Systémový roztok pro analyzátory glukózy Ebio a  Biosen, 1ks x 1000 ml, REF.: 0030343.001,

výrobce: SKALAB s.r.o., Slovenská 723/ 61, 568 02 Svitavy

 

Kalibrátor Multistandard solution 12 mmol/l, 50 ks x 2 ml, REF.: 5211-3015,

výrobce: EKF-diagnostic GmbH, Ebendorfer Chaussee 3, D-39179 Barleben

 

Cleaning solution and protein remover (5 ks x30 µl), REF.: 0201-0004-001

 

Sensor test solutionfor glucose and lactate (20 ks), REF.:5130-6055

 

Dodavatel reagencií: Medesa, s. r. o., Na Vyšehradě 1092, 572 01 Polička

  

OSN-SSpotřební materiálOSN-E

Chip senzor Glucose, typ II, REF.:. 5206.3011, uchovává se v lednici při teplotě +4 až +8 0C.

Špičky k automatickým pipetám

Zkumavky

 

OSN-SPříprava k činnostiOSN-E

 

OSN-SPracovní postup

 

OSN-SStručný popis postupuOSN-E

Stanovení glukózy v séru, plazmě a v hemolyzátu z plné krve

-     do přístroje vložit na pozici STD 1 mikrozkumavku se standardem

-     do přístroje vložit na pozici C1 a C2 naředěná kontrolní séra ve dvou hladinách (v poměru 1:50)

-      naředit vzorek (sérum, plazma) systémovým roztokem v poměru 1:50 (10 ml vzorku + 500 ml

        systémového roztoku) nebo pracovat již s připraveným kepem k měření (20 ul kapilára s krví

        vložená do předem naplněné mikrozkumavky hemolyzačním činidlem). Pozn.: Hemolyzační roztok

       před měřením dobře promíchat a na kepy přiřadit čárové kódy k jednotlivým pacientům za účelem

       přenesení naměřených hodnot do LIS.

-      naředěné vzorky vložit do karuselu

-     na displeji stisknout START. Pozn.: Přístroj začne měření v pořadí standard, kontrola na pozici

      1, kontrola na pozici 2, vzorky

-     výsledky jsou vytištěny termotiskárnou

 

Stanovení glukózy v moči

-     moč předředit v poměru 1:10 (100 ml moči + 900 ml destilované vody)

-     předředěnou moč nařeďit stejně jako plnou krev nebo sérum a založit do karuselu přístroje

-     stisknout START

-     výsledek vynásobit deseti (kompenzace předředění)

 

 

OSNOSN-SKalibrace a návaznost

Přesný popis kalibrace metody je uveden v uživatelském manuálu pro analyzátor Biosen C-Line Clinic/GP+

a  PI-OKBH-22 Manuál analyzátoru Biosen

 

Ke kalibraci metody pro stanovení glykémie v hemolyzátu kapilární krve se používá vodný roztok kalibrátoru Multistandard solution, REF.: 5211-3015 s deklarovanou hodnotou 12,0 mmol/l. Kalibrační materiál je určen k přímému užití bez ředění Kalibrátor je skladován v lednici při teplotě +2 až + 8 oC , datum exspirace je vyznačen na balení. Po otevření se kalibrátor nepoužívá déle než osm hodin.

 

Metrologická návaznost kalibrátoru je na SRM NIST 917b (D-glucose).

OSN-E

OSN-SCharakteristika spolehlivosti

Metrologická návaznost kalibrátoru je na SRM NIST 917b (D-glucose).

 

Nepřesnost:

Odhady nepřesnosti v sérii a celkové nepřesnosti byly získány měřením na základě protokolu EP5-A NCCLS (National Commitee for Clinical Laboratory Standards). Celkový počet pozorování byl N = 80 u každého vzorku. Výsledky v tabulce jsou platné pro měření na analyzátoru BIOSEN.

 

Měřící rozsah:

Při stanovení glukózy v séru, plazmě je oblast linearity 0,5 až 50 mmol/l

 

Mez detekce:

0,15 mmol/l

 

Opakovatelnost (přesnost v sérii):

Sérum, plazma:            CV < 3 % pro více než 10 testů na hladině 12 mmol/l

                                    

Mezilehlá preciznost (Reprodukovatelnost mezi sériemi):

Sérum, plazma:            CV < 1,5 % na hladině 12  mmol/l

                                  

Srovnání metod: (SKALAB s.r.o.)

Bylo analyzováno 40 vybraných sér pacientů na analyzátoru ADVIA 1650 s použitím diagnostické soupravy Glukóza GOD-PAP. Shodné vzorky byly analyzovány na analyzátoru BIOSEN. Výsledky srovnání byly statisticky vyhodnoceny neparametrickou metodou podle Passinga-Babloka .

 

 

Srovnání metody Glukóza s metodou stanovení glukózy na analyzátoru BIOSEN

 

Passingova-Bablokova regrese

n

Směrnice 

 (95% CI)

Intercept

 (95% CI)

 r *

 

40

0,985

0,065

0,998

 

 

(0,957 až 1,012)

 

(-0,112 až 0,250)

 

 

* pořadový korelační koeficient

 

OOSN-SDokumentace, zpracování dat a vydávání výsledkůOSN-E

Hodnoty výsledků stanovení glukózy v séru, plazmě, hemolyzátu se udávají na jedno desetinné místo, v mmol/l.

Poznámka: Přepočet starších jednotek používaných dříve pro glukózu: mg/dl x 0,0555 = mmol/l.

 

Výsledky stanovení jsou přenášeny z analyzátoru pomocí čárových kódů do LIS. Všechny výsledky se archivují v elektronické formě v laboratorním informačním systému. Primární data z analyzátoru jsou v tištěné podobě archivována.

 

Lékařům na odděleních a ambulancích Nemocnice Agel Ostrava Vítkovice a.s. jsou výsledky vyšetření k dispozici elektronicky v NIS a v případě potřeby v tištěné podobě u příjmového okna v laboratoři.

Spolupracujícím lékařům jsou výsledky zasílány průběžně elektronicky.

 

 Výsledkový list obsahuje:

·         identifikaci laboratoře, která výsledek vydala

·         odkaz na akreditaci laboratoře

·         datum a čas vydání nálezu

·         jednoznačnou identifikaci pacienta

·         zdravotní pojišťovnu pacienta

·         identifikaci požadujícího subjektu (lokalizaci pacienta, je-li to vhodné)

·         identifikaci požadujícího lékaře  (resp. oddělení)

·         diagnózu pacienta

·         druh biologického materiálu (např. sérum, plazma, moč, krev u vyšetření krevního obrazu)

·         jasně srozumitelnou identifikaci vyšetření

·         datum a čas přijetí vzorku laboratoří

·         datum a čas odběru vzorku,

·         výsledek vyšetření s odpovídajícími jednotkami (nejčastěji SI jednotky)

·         označení akreditované metody

·         referenční meze

·         interpretaci výsledků, je-li to nutné

·         jiné poznámky (např. kvalita nebo dostatečnost primárního vzorku, pokud tato může nežádoucím způsobem ovlivnit výsledek požadovaného vyšetření)

·         identifikaci osob, které výsledkovou zprávu kontrolovaly a schválily

·         zkratky identifikující žádanku, například: 20.BR-0777

·         20: den v měsíci, BR: biochemie rutina, 0777: číslo vzorku

·         20: den v měsíci, HH: hematologie, 0777: číslo vzorku

 

OSN-SReferenční a varovná rozmezíOSN-E

Referenční rozmezí očekávané koncentrace glukózy u dětí v séru, plazmě přijala laboratoř z Encyklopedie laboratorní medicíny pro klinickou praxi – verze 9.

 

Sérum, plazma:

 

Věk od - do

Dolní referenční mez

mmol/l

Horní referenční mez

mmol/l

0 až 1 den

2,2

3,3

1den až 4 týdny

2,8

4,4

4 týdny až 15 let

3,3

5,6

nad 15 let

3,5

5,6

 

V moči:                                    0,1 – 0,8 mmol/l

V hemolyzátu:                          3,5 – 5,6 mmol/l

V likvoru:                                 2,5 – 4,0 mmol/l (cca 60% plazmatické konc.)

OSN-E

OSN-SInterpretace výsledků, konzultační činnosti a hlášeníOSN-E

Pro diagnostiku diabetes mellitus v souvislosti s hodnotami glykémie v krvi se uvádí následující cut off hodnoty pro krev odebranou do antiglykolytického činidla (EDTA a NaF ):

1)       Výsledek v náhodně odebraném vzorku krve je ≥ 11,1 mmol/l.

2)       Hladina glukózy v krvi nalačno je ≥ 7,0 mmol/l.

3)       Koncentrace glukózy v krvi 2 hodiny po jídle, nebo při orálním glukózovém tolerančním testu je        ≥ 11,1 mmol/l.

Jestliže je alespoň jedno z uvedených kriterií pozitivní v opakovaných vyšetřeních s časovým odstupem, je diagnosa diabetu mellitu považována za prokázanou. Při hladinách glykemie na lačno 5,6 až 7,0 mmol/l, nebo při rozporech mezi různými vyšetřeními stejného pacienta se provádí oGTT (orální glukózový toleranční test), PI-OKBH-07 Provedení o-GTT.

Ke zvýšení či snížení hladiny glukózy může dojít i z jiných příčin, než je diabetes mellitus (intravenózní výživa, silný stres, cévní mozková příhoda, nadměrná produkce inzulinu, hladovění, aj.)

Například:

Snížení sérové (plazmatické) koncentrace glukózy:

-          hyperinzulinismus (málo alfa-buněk pankreatu, inzulinóm)

-          relativní hyperinzulinismus (adrenokortikoidální nedostatečnost, léze hypotalamu)

-          hladovění

-          endokrinopatie (hypotyreóza, hypopituitarismus)

-          intolerance fruktózy

-          abusus alkoholu

-          vliv některých léků (např. salicyláty)

-          špatné ukládání či mobilizace glykogenu (jaterní onemocnění: akutní hepatitida, cirhóza)

-          nedostatečné zásoby glykogenu v játrech (novorozenci, cirhotici)

Zvýšení sérové (plazmatické) koncentrace glukózy:

-          diabetes mellitus 

-          onemocnění pankreatu (akutní i chronická, hemochromatóza, karcinom pankreatu)

-          onemocnění ledvin

-          vliv některých léků (glukokortikoidy, adrenalin, fenothiaziny, perorální kontraceptiva)

-          jaterní onemocnění

-          jiné (infarkt myokardu, popáleniny, stres, akutní krvácení, hemodialýza, úrazy, pooperační stavy)

-          onemocnění CNS (tumory, krvácení do mozku, edém mozku, encefalitida)

-          preanalytická chyba (odběr vzorku po jídle)

Zvýšení hladiny glukózy v moči:

-          diabetes mellitus

-          sepse

-          akutní pankreatitida

-          Cushingův syndrom

-          nádory nadledvin a hypofýzy

-          akutní renální selhávání

-          podání kortikoidů, adrenalinu, hormonů štítné žlázy

-          glykosurie v těhotenství

-          hepatopatie

Snížení hladiny glukózy v likvoru:

-          akutní bakteriální infekce (pozn.: při virové infekci je hladina většinou normální)

 

Postup pro nahlášení kritické hodnoty výsledku laboratorního vyšetření je uveden ve směrnici S-OKBH-012 Směrnice pro vydávání výsledků.

 

OSN-SŘízení kvalityOSN-E

Ke kontrole a řízení kvality pro stanovení glukózy v séru, plazmě se používá tekutý kontrolní materiál firmy Biorad Liquid Assayed Multiqual ve dvou hladinách koncentrace glukózy (REF: 694, 695).

 

Příprava:

Tekutá kontrolní séra se uchovávají zamražená při teplotě -20°C.

Před použitím se nechá kontrola za laboratorní teploty a bez přístupu přímého světla pozvolna rozpustit za občasného promíchání kroužením lahvičky pro zajištění homogenity materiálu. Netřepe se, aby se zabránilo tvorby pěny. Rozmražený materiál se uchovává v lednici při +2 až +8 °C a před každým opakovaným použitím se opatrně promíchá pro zajištění homogenity vzorku kontroly.

 

Pozn. pro stanovení glukózy v hemolyzátu :

Kontrolní materiály se musí těsně před měřením naředit pomocí hemolyzačního činidla v poměru 1:51,

tj.10 µl vzorku a 500 µl hemolyzačního činidla.

 

Stabilita:

Tekutá kontrolní séra se uchovávají zamražená při teplotě -20°C, v tom případě jsou stabilní až do doby exspirace vyznačené na obale. Používaná rozmražená lahvička s kontrolním sérem se uchovává v lednici  při teplotě +2 až +8 °C do spotřebování, nejdéle 1 týden.

 

Použití:

Měření kontrolního materiálu se provádí denně na dvou hladinách po každé kalibraci. Výsledky jsou kontrolovány pověřeným pracovníkem. Postupuje se podle směrnice S-OKBH-004 Směrnice pro IKK

 

Jednou týdně se provádí měření kontroly glukózového senzoru (kontrola se měří jako vzorek pacienta). Hodnota se zaznamenává do  F-OKBH-020 Kontrola glu senzoru

 

Externí kontrola kvality je zajištěna účastí v kontrolních cyklech SEKK.

 

Dokumentace:

Výsledky interní kontroly kvality jsou tištěny a archivovány. Dlouhodobě jsou výsledky kontrol sledovány v programu UnityRealTime firmy Biorad a 1x měsíčně je provedeno celkové zhodnocení výsledků kontrol vedoucím úseku. 

 

OSN-SPoznámky

Charakteristika spolehlivosti dle příbalového letáku výrobce systémového roztoku pro analyzátory glukózy Ebio a Biosen, firmy SKALAB s.r.o.

 

OSN-SJiné související informaceOSN-E

Nevyplněno

 

OSN-SLiteraturaOSN-E

 

OSN-SAppendixyOSN-E

Nevyplněno

 

OSN-SAutorské poznámkyOSN-E

Nevyplněno

 

OSN-SRecenze, schváleníOSN-E

Autor a spoluautoři: Mgr. Alena Švihálková