OSN-SAbstraktOSN-E

Kvantitativní stanovení glykovaného hemoglobinu A1c na automatickém kapalinovém chromatografu Arkray Adams HA-8180, určeného ke stanovení stabilní A1c frakce GHb na principu iontově výměnné chromatografie.

 

OSN-SSeznam souvisejících dokumentůOSN-E

Laboratorní příručka

Příručka kvality

Provozní řád

Skartační řád 

S-OKBH-004 Směrnice pro IKK - OKBH

S-OKBH-005 Směrnice EHK

PI-OKBH-90 Manuál analyzátoru Arkray Adams HA-8180

Příbalový leták kontrolního materiálu společnosti Arkray, MAS Diabetes QC Kit. REF: DBCL-MP

Návodu k obsluze přístroje Arkray Adams HA-8180 (externí dokumentace)

 

OSN-SKódy, názvy, definice a terminologieOSN-E

Glykovaný hemoglobin A1c, HbA1c , glykohemoglobin A1c, HbA1c

Název v lokálním číselníku LIS: Glykovaný hemoglobin A1c

Klíč v lokálním číselníku LIS: BGHBA1C

Číslo metody v lokálním číselníku LIS: 40

Seznam zdravotních výkonů VZP: 81449

 

OSN-SPrincipOSN-E

Metoda využívá principy iontoměničové vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). Vzorky jsou automaticky ředěny ve vzorkovací stanici a nastřikovány do analytické kolony. Duální čerpadla chromatografu dodávají naprogramovaný gradient pufru se stoupající iontovou silou do kolony, kde jsou pak hemoglobiny separovány na základě své iontové interakce s materiálem kolony. Separované hemoglobiny poté procházejí průtokovou komůrkou filtračního fotometru, ve kterém se měří změny absorbance při 420 nm. Další filtr při 500 nm provádí korekci na absorbanci pozadí.

Software přístroje provádí redukci hrubých dat shromážděných z každé analýzy. Pro úpravu vypočtených hodnot HbA1c se používá kalibrace ve dvou hladinách. Pro každý vzorek se generuje záznam vzorku, který zahrnuje retenční časy detekovaných píků a chromatogram. Pllocha píku A1c se vypočítává pomocí exponenciálně modifikovaného Gaussova algoritmu (EMG), který odečítá obsah píků labilního A1c a karbamylovanéno hemoglobinu z plochy píku A1c. 

 

OSN-SMísto provádění postupuOSN-E

OKBH, úsek biochemický, Nemocnice AGEL Ostrava - Vítkovice a.s., Zalužanského 1192/15, 703 84 Ostrava-Vítkovice

 

OSN-SBezpečnostní aspektyOSN-E

Je nutné dodržovat obecné zásady bezpečnosti práce podle směrnice VN BOZP č.8.02, ale i zásady práce s biologickým materiálem, který může být zdrojem přenosu některých infekcí. Zejména je třeba zachovávat pravidla osobní hygieny, používat osobní ochranné pracovní prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci nejíst, nepít a nekouřit. Po práci a před jídlem omýt pokožku především rukou teplou vodou a mýdlem a ošetřit vhodným reparačním krémem. Při zasažení očí vymývat velkým množstvím vlažné vody nejméně 15 minut. Při zasažení oděvu a kůže odložit veškeré kontaminované oblečení. Okamžitě kůži omýt velkým množstvím pokud možno vlažné vody popř. mýdlem nebo jiným vhodným mycím prostředkem. Při náhodném požití vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru vody a vyhledat lékařskou pomoc.

 

OSN-SFáze před vyšetřenímOSN-E

Diabetes mellitus je stav, pro který je charakteristická hyperglykémie v důsledku neschopnosti těla využívat

krevní glukózu jako zdroj energie. U diabetu 1. typu nevytváří pankreas inzulín, takže glukóza nemůže vstoupit do buněk, aby byla využita jako zdroj energie. U diabetu 2. typu buď pankreas nevytváří dostatečné množství inzulínu  nebo tělo nevyužívá inzulín správně.  Přímé a nepřímé účinky hyperglykémie na lidský cévní systém jsou častou příčinou morbidity a mortality u diabetu obou typů. Jedná se o komplikace makrovaskulární (ischemická choroba srdeční, onemocnění periferních tepen a mozková cévní příhoda) a mikrovaskulární (diabetická nefropatie, neuropatie a retinopatie). Diabetes mellitus postihuje přibližně 7 % světové populace. Léčba diabetu vyžaduje dlouhodobé udržování hladiny krevní glukózy co nejblíže normálním hodnotám, aby se předešlo dlouhodobým následkům na cévním systému. Jediné měření glykémie nalačno ukazuje okamžitou hladinu glukózy (posledních hodin), ale nemůže ukázat skutečnou schopnost organismu krevní glukózu regulovat. Měření hemoglobinu A1c (HbA1c) jednou za dva až tři měsíce je již zavedeným způsobem kontroly glykémie v rámci léčby a péče o pacienty s diabetes mellitus. 

HbA1c se tvoří ve dvou krocích neenzymatickou glykací HbA. V prvním kroku dochází k tvorbě nestabilního aldiminu (labilní A1c nebo pre-A1c), tj. k reverzibilní reakci mezi karbonylovou skupinou glukózy a valinem na N-konci řetězce β hemoglobinu. Tvorba labilního A1c je přímo úměrná koncentraci glukózy v krvi. Během cirkulace červených krvinek se určité množství labilního A1c přeměňuje (Amadoriho přesmykem) na stabilní ketoamin HbA1c

Metoda stanovení pomocí soupravy firmy Arkray je založena na chromatografické

separaci HbA1c na katexové koloně. Separace je optimalizována tak, aby byly eliminovány interference

způsobené variantami hemoglobinu, labilním A1c a karbamylovaným hemoglobinem.

 

OSN-SOdběr primárního vzorku a transportOSN-E

Odběr

Odběr se provádí standardním způsobem ze žilní krve, do plastové zkumavky s přídavkem EDTA za použití uzavřeného odběrového systému. Pacient musí být na lačno.

Transport

Transport materiálu na oddělení OKBH VTN je popsán ve směrnici S-OKBH-006 Směrnice pro transport a příjem vzorků.

Skladování

Krev je na OKBH po provedení analýzy skladována v místnosti k tomu určené po dobu 1 dne pro potřeby dodatečně požadovaných vyšetření a ověření identifikace.

Interference (podle příbalového letáku)

Koncentrace hemoglobinu F až do 25 % nezkreslují výsledky analýzy. V případech, kde jsou koncentrace hemoglobinu F vyšší než 25 %, výsledné hodnoty HbA1c se nevydávají.

Ikterus, indikovaný koncentracemi bilirubinu až do 20 mg/dl, nezkresluje výsledky analýzy.

Lipémie, jak potvrdilo měření normálního a diabetického vzorku s přidaným lipemickým vzorkem klinicky získaného séra s výslednými koncentracemi triglyceridů až 6 000 mg/dl, nezkresluje výsledky analýzy.

Labilní A1c, jak signalizují koncentrace glukózy do výše 1000 mg/dl, nezkresluje výsledky analýzy.

Stabilita měřené veličiny

20 až 25°C: 2 dny, 4 až 8°C: 5 dní, nezamrazovat

 

OSN-SOmezeníOSN-E

Laboratoř může odmítnout přijetí materiálu a neprovést požadované vyšetření z obecných důvodů uvedených v Laboratorní příručce v kapitole LP D-02 Kriteria přijetí nebo odmítnutí vzorku..

 

OSN-SManipulace se vzorkyOSN-E

Manipulace se vzorky probíhá podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem uvedených v Laboratorní příručce a Příručce kvality.

 

OSN-SPřístroje a pomůckyOSN-E

Analyzátor Arkray Adams HA-8180

 

OSN-SReagencieOSN-E

 

OSN-SSpotřební materiálOSN-E

 

OSN-SPříprava k činnostiOSN-E

Před uvedením přístroje do pracovní činnosti se zkontroluje:

 

Během analýzy se průběžně kontrolují chromatogramy.

Možné příčiny abnormálních výsledků:

Chybová hlášení, další možné problémy a jejich odstranění jsou uvedeny v originálním návodu k obsluze přístroje Arkray Adams HA-8180

 

OSN-SPracovní postupOSN-E

  1. Zkontroluje se množství eluentů, stav odpadní nádoby.
  2. Změří se kontrolní materiál v hladině 1 a 2.
  3. Měření se zahájí stisknutím položky START
  4. Vyhovuje-li kontrola, je možné analyzovat vzorky.
  5. Průběžně se kontrolují chromatogramy – tvar a počet píků, chybová hlášení.

Postupuje se podle pracovní instrukce PI-OKBH-90 Manuál analyzátoru Arkray Adams HA-8180

 

OSN-SStručný popis postupuOSN-E

 

OSN-SKalibrace a návaznostOSN-E

Ke kalibraci je používán kalibrační set Calibrator Kit 80, REF: 71266

Dvě hladiny lyofilizovaného standardu na bázi lidského séra, s deklarovanými hodnotami.

Příprava:

Ø  Kalibrátor a speciální rozpouštědlo vyndat z lednice a nechat stát při pokojové teplotě cca 10 min

Ø  Napipetovat přesně 3 ml rozpouštědla do každé lahvičky s kalibrátorem a uzavřít víčkem

Ø  Nechat lahvičky přibližně deset minut při pokojové teplotě, poté zlehka promíchat bez vzniku bublinek, dokud není kalibrátor kompletně rozpuštěný

Stabilita: Lyofilizovaný kalibrátor je stabilní do data exspirace uvedeného na obalu. Po rozpuštění uchovávat produkt při teplotě 2 °C až 8 °C a spotřebovat během osmi hodin.

 

Vlastní kalibrace: Pozn.:  Kalibrace se provádí při výměně kolony, při výsledku kontroly mimo povolené rozmezí.

Postup:

Kalibrační materiál: Calibrator Kit 80, REF: 71266 (určen pro jedno použití)

Ø  Kalibrační materiál Low solution a High solution pečlivě promícháme a napipetujeme do kepů

Ø  Do stojánku Hemolysis Calibrator Rack vložit na níže uvedené pozice

4.   zkumavka nebo kep s plnou krví

5.   zkumavka nebo kep s plnou krví

             9.  kalibrační materiál Low solution

                                10.           kalibrační materiál High solution

Ø  Měření zahájit stisknutím položky START, přístroj si najede se stojánkem do aspirační pozice

 

Ø  Po ukončení kalibrace se zobrazí Standby obrazovka

 

Návaznost: IFCC referenční metoda.

 

OSN-SCharakteristika spolehlivostiOSN-E

Podle příbalového letáku:

Měřící rozsah: 9 až 195 mmol/mol

Aktuální charakteristiky spolehlivosti:

Aktuální charakteristiky spolehlivosti jsou uvedeny v platném verifikačním protokolu.

 

OSN-SDokumentace, zpracování dat a vydávání výsledkůOSN-E

Výsledky stanovení jsou kontinuálně tištěny a automaticky se kopírují na flash disk, umístěný v modulu RSLogger za zadní stranou přístroje. Data z flash paměti zálohuje VŠ do PC dle instrukcí v externím návodu firmy MEDISTA  Návod na správu dat z primární zálohy výsledku na Arkray Adams A1c HA – 8180V

Všechny výsledky se rovněž archivují v elektronické formě v laboratorním informačním systému.

Hodnoty výsledků se udávají v celých číslech v jednotkách [mmol/mol].

Lékařům na odděleních a ambulancích Nemocnice Agel Ostrava Vítkovice a.s. jsou výsledky vyšetření k dispozici elektronicky v NIS a v případě potřeby v tištěné podobě u příjmového okna v laboratoři.

Spolupracujícím lékařům jsou výsledky zasílány průběžně elektronicky a následující den doručovány v tištěné podobě se svozem biologického materiálu.

 

Výsledková zpráva obsahuje:

·         identifikaci laboratoře, která výsledek vydala

·         odkaz na akreditaci laboratoře

·         datum a čas vydání nálezu

·         jednoznačnou identifikaci pacienta

·         zdravotní pojišťovnu pacienta

·         identifikaci požadujícího subjektu (lokalizaci pacienta, je-li to vhodné)

·         identifikaci požadujícího lékaře  (resp. oddělení)

·         diagnózu pacienta

·         druh biologického materiálu (sérum, plazma, moč, krev u vyšetření krevního obrazu)

·         jasně srozumitelnou identifikaci vyšetření

·         datum a čas přijetí vzorku laboratoří

·         datum a čas odběru vzorku

·         výsledek vyšetření s odpovídajícími jednotkami (SI jednotky)

·         označení akreditované metody

·         referenční intervaly vyšetření

·         interpretaci výsledků, je-li to nutné

·         jiné poznámky (např. kvalita nebo dostatečnost primárního vzorku, pokud tato může nežádoucím způsobem ovlivnit výsledek požadovaného vyšetření)

·         identifikaci osob, které výsledkovou zprávu kontrolovaly a schválily

·         zkratky identifikující žádanku

·         př. 20.BR-0777

·         20: den v měsíci, BR: biochemie rutina, 0777: číslo vzorku

·         př. 20.HH-0777

·         20: den v měsíci, HH: hematologie, 0777: číslo vzorku

 

OSN-SReferenční a varovná rozmezíOSN-E

Referenční meze: 28 až 40 mmol/mol resp. 2,8 až 4,0 %

 

OSN-SInterpretace výsledků, konzultační činnosti a hlášeníOSN-E

Glykace molekuly hemoglobinu vzniká neenzymovou reakcí glukózy nebo glukoza-6-fosfátu s amino skupinou termálního valinu beta řetězce hemoglobinu. Z reakční rovnováhy vyplývá, že podíl glykovaného hemoglobinu je úměrný koncentraci volné glukózy. Proto u pacientů s trvale zvýšenou hladiny glukózy se vytváří větší množství glykovaného hemoglobinu. Protože hemoglobin je obsažen v erytrocytech, jsou děje vázány na dobu života červené krvinky, cca 120 dní, je stanovení glykovaného hemoglobinu tzv. biochemickou pamětí předcházející hyperglykémií. Jde tedy o ukazatel stavu glykémie za dobu

4 až 8 týdnů.

Patologické změny

< 42 mmol/mol - kompenzace diabetu: výborná

45 až 60 mmol/mol - uspokojivá

> 60 mmol/mol  - neuspokojivá

 

OSN-SŘízení kvality

Kvalita je zabezpečována dodržováním pokynů pro provoz a údržbu přístroje, pravidelnou interní a externí kontrolou kvality.

Interní kontrola kvality

Ø  Kvalita prováděných vyšetření je ověřována 1x denně analýzou kontrolního materiálu, který je specifikován ve formuláři F-OKBH-30. Výsledky kontrol jsou ověřovány obsluhou ihned po změření, zapsány do formuláře F-OKBH-19 Interní kontrola kvality a primární data jsou ukládány do dokumentace u analyzátoru.

Ø  Jako kontrolní materiál se používá EXTENSURE HbA1c Lyophilised Control, REF: HB711SBAr, HB712SBAr

 

Příprava kontroly:  

Ø  Lyofilizát pro jednotlivé hladiny kontroly rozpustit v 250µl Aqua Pro Injectione

Ø  Kontrolu za občasného promíchání nechat rozpouštět min. 15 minut

Ø  Kontrolu dobře promíchat, rozpipetovat alikvoty po 5µl do Eppendorf zkumavek a zamrazit na teplotu -20°C

Příprava hemolyzovaného kontrolního materiálu:

Ø  Vyndat  alikvot 5µl z mrazáku, nechat rozpustit při laboratorní teplotě

Ø  Přidat 450µl hemolyzačního promývacího roztoku 80H

Ø  Kontrolu promíchat na třepačce vortex

 

Stabilita:  Kontrola je stabilní do data exspirace vyznačené na obalu.

                Kontrola smí být rozmražena a znovu zamražena jedenkrát

Použití:    Měření kontrolního materiálu se provádí dle pracovní instrukce PI-OKBH-090 Manuál analyzátoru 

                Arkray Adams HA-8180 denně na obou hladinách a po každé kalibraci. Výsledky

   jsou kontrolovány pověřeným pracovníkem. Postupuje se podle směrnice

   S-OKBH-004 Směrnice pro IKK - OKBH.

Dokumentace:

Výsledky interní kontroly kvality jsou uchovávány v softwaru přístroje, zálohovány na externí disk a elektronicky přenášeny do programu LIS a Unity Real Time. Kontrola kvality je v LIS rovněž validována vedoucí úseku. Zároveň jsou výsledky interní kontroly kvality zapisovány do formuláře  F-OKBH-019 GHb Interní kontrola kvality v dokumentaci u analyzátoru.

 

Externí kontrola kvality

Externí kontrola kvality v rámci České republiky je organizována společností SEKK, laboratoř se jí účastní 2x ročně.OSN-E

 

OSN-SPoznámkyOSN-E

Nevyplněno

 

OSN-SJiné související informaceOSN-E

Nevyplněno

 

OSN-SLiteraturaOSN-E

SLP

Firemní příbalový leták k soupravě. 

Doporučení ČSKB: Změna jednotky pro stanovení glykovaného hemoglobinu A1c (HbA1c) a rozhodovacích mezí.

 

OSN-SAppendixyOSN-E

Nevyplněno

 

OSN-SAutorské poznámkyOSN-E

Nevyplněno

 

OSN-SRecenze, schváleníOSN-E

Autor: Mgr. Alena Švihálková