OSN-SAbstraktOSN-E

Kvantitativní stanovení thyrotropinu (TSH) v lidském séru a plazmě metodou chemiluminiscence na imunochemickém analyzátoru DxI 800.

OSN-SSeznam souvisejících dokumentůOSN-E

Příručka kvality

Provozní řád

Skartační řád 

LP C-11 Informace k transportu vzorků

PI-OKBH-06 Manuál analyzátoru DxI 800

Příbalový leták reagenční soupravy Access TSH (3rd IS), Kat.č. B63284 – 2x100 testů

Příbalový leták kalibrátoru Access TSH (3rd IS) Calibrators (kat.č. B63285)

Příbalový leták konkrétního používaného kontrolního materiálu společnosti Biorad

OSN-SKódy, názvy, definice a terminologieOSN-E

TSH, thyroidu stimulující hormon, thyrotropin, tyreotropní hormon, hTSH

Název v lokálním číselníku LIS: Thyreoidální stimulační hormon TSH_3gen

Klíč v lokálním číselníku LIS: TSH

Číslo metody v lokálním číselníku LIS: 72

Kód metody v analyzátoru e601: TSH3

Seznam zdravotních výkonů VZP: 93195

OSN-SPrincipOSN-E

Sendvičový test

Vzorek se přidá do reakční zkumavky s konjugátem myší protilátky proti hTSH s alkalickou fosfatázou, tlumivým proteinovým roztokem a paramagnetickými částicemi potaženými imobilizovanou myší monoklonální protilátkou proti hTSH. hTSH se naváže na imobilizovanou monoklonální protilátku proti hTSH na pevné fázi, přičemž konjugát myší protilátky proti hTSH s alkalickou fosfatázou reaguje s odlišným antigenním místem na hTSH. Po inkubaci v reakční zkumavce jsou materiály navázané na pevnou fázi zadrženy v magnetickém poli, zatímco nenavázané materiály se odstraní promytím. Poté se do zkumavky přidá chemiluminiscenční substrát Lumi-Phos* 530 a světlo generované touto reakcí se měří luminometrem. Produkce světla je přímo úměrná koncentraci TSH ve vzorku. Množství analytu ve vzorku se určuje z uložené vícebodové kalibrační křivky.

OSN-SMísto provádění postupuOSN-E

OKBH, úsek biochemický, Nemocnice AGEL Ostrava - Vítkovice a.s., Zalužanského 1192/15, 703 84 Ostrava-Vítkovice

OSN-SBezpečnostní aspektyOSN-E

Je nutné dodržovat obecné zásady bezpečnosti práce podle směrnice S-OKBH-002 Směrnice o bezpečnosti práce a směrnice VN BOZP č.8.02, ale i zásady práce s biologickým materiálem, který může být zdrojem přenosu některých infekcí. Zejména je třeba zachovávat pravidla osobní hygieny, používat osobní ochranné pracovní prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci nejíst, nepít a nekouřit. Po práci a před jídlem omýt pokožku především rukou teplou vodou a mýdlem a ošetřit vhodným reparačním krémem. Při zasažení očí vymývat velkým množstvím vlažné vody nejméně 15 minut. Při zasažení oděvu a kůže odložit veškeré kontaminované oblečení. Okamžitě kůži omýt velkým množstvím pokud možno vlažné vody popř. mýdlem nebo jiným vhodným mycím prostředkem. Při náhodném požití vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru vody a vyhledat lékařskou pomoc.

OSN-SFáze před vyšetřenímOSN-E

Thyroidu stimulující hormon (TSH, thyrotropin) je glykoprotein s molekulovou hmotností přibližně 30 000 daltonů, skládající se ze dvou podjednotek, β-podjednotka je nositelem imunologické a biologické specifiky TSH, kdežto α-řetězec je nositelem druhové specificity a má shodnou sekvenci aminokyselin s α-řetězcem LH, FSH, a hCG.

TSH vzniká ve specifických basofilních buňkách přední části hypofýzy a vykazuje cirkadiánní sekreční rytmus. Uvolňování TSH (thyrotropní hormon) je centrálním regulačním mechanismem biologické aktivity hormonů štítné žlázy. TSH má stimulační účinky na všech stupních vytváření a sekrece hormonů štítné žlázy; má rovněž proliferativní efekt.

Stanovení TSH slouží jako úvodní test diagnostiky štítné žlázy. Každá velmi malá změna v koncentraci volných thyroidních hormonů přináší mnohem větší změny hladiny TSH opačného rázu. TSH je tedy velmi citlivým a specifickým markerem hodnocení funkce štítné žlázy a současně vhodným pro časnou detekci nebo vyloučení poruch centrální regulační smyčky mezi hypotalamem, hypofýzou a štítnou žlázou.

OSN-SOdběr primárního vzorku a transportOSN-E

Odběr

Sérum: Odběr se provádí standardním způsobem ze žilní krve, do plastové zkumavky

s aktivátorem srážení nebo se separačním gelem za použití uzavřeného odběrového systému. Speciální příprava pacienta ani dieta není nutná, pro obvyklé vyšetřování je vhodný odběr ráno.

Plazma: Li-heparin

Transport

Transport materiálu na oddělení OKBH VTN je popsán ve směrnici S-OKBH-006 Směrnice pro transport a příjem vzorků.

Skladování

Sérum/plazma je na OKBH po provedení analýzy skladováno v lednici při 2-8°C po dobu 2 dnů pro potřeby dodatečně požadovaných vyšetření. Doba dodatečně požadovaných vyšetření se řídí podle seznamu uvedeném v LP C-03 Ústní požadavky na vyšetření. V případě delšího skladování pro potřebu analýzy, je sérum/plazma skladováno zamraženo při teplotě -20°C po dobu maximálně 1 měsíce.

Interference

Výrobce neuvádí

Stabilita měřené veličiny v séru

+20 až +25°C: 24 hodin, +4 až +8°C: 3 dny, -20°C: 3 měsíce, zamrazit pouze jednou, nerozmrazovat při vysoké teplotě.

OSN-SOmezeníOSN-E

Laboratoř může odmítnout přijetí materiálu a neprovést požadované vyšetření z obecných důvodů uvedených v Laboratorní příručce v kapitole Kritéria pro přijetí nebo odmítnutí primárních vzorků. Vzorky, které byly stabilizovány azidem sodným, nemohou být použity. Zvláštní pozornost je třeba věnovat pacientům léčeným biotinem, myšími monoklonálními protilátkami a pacientům s vysokým titrem protilátek proti rutheniu. U pacientů, kteří dostávají vysoké dávky biotinu (např. >5 mg/den), mohou být vzorky odebrány nejdříve za 8 hodin po podání poslední dávky biotinu.

OSN-SManipulace se vzorkyOSN-E

Manipulace se vzorky probíhá podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem uvedených v Laboratorní příručce a Příručce kvality.

Primární zkumavka s biologickým materiálem je centrifugována 10 minut při 4000 otáčkách za minutu. Po centrifugaci je odeslána k analýze. Vzorky obsahující sraženinu musí být před analýzou opět centrifugovány. Po ukončení všech analýz je zkumavka umístěna na příslušné místo v archivu v lednici.

Nepoužívají se vzorky tepelně inaktivované.

OSN-SPřístroje a pomůckyOSN-E

Centrifuga

Imunochemický analyzátor firmy Beckman Coulter DxI 800

OSN-SReagencieOSN-E

Access TSH (3rd IS), kat.č. B63284 – 2x100 testů

Výrobce soupravy: Beckman Coulter Inc.

Dodavatel soupravy: Beckman Coulter Inc.

R1a: Paramagnetické částice potažené myší monoklonální protilátkou proti lidskému TSH,

suspendované ve fyziologickém roztoku pufrovaném TRIS s povrchově aktivní látkou, hovězí

sérový albumin (BSA), < 0,1% azid sodný a 0,1% ProClin** 300.

R1b: Izotonický tlumivý roztok TRIS s povrchově aktivní látkou, BSA, protein (myší), < 0,1% azid

sodný a 0,1% ProClin 300.

R1c: Konjugát myší monoklonální protilátky proti lidskému TSH s alkalickou fosfatázou, v izotonickém

tlumivém roztoku ACES, s povrchově aktivní látkou, roztok BSA, protein (hovězí, kozí, myší)

< 0,1% azid sodný a 0,25% ProClin 300.

R1d: Konjugát myší monoklonální protilátky proti lidskému TSH s alkalickou fosfatázou, v izotonickém

tlumivém roztoku ACES, s povrchově aktivní látkou, roztok BSA, protein (hovězí, kozí, myší)

< 0,1% azid sodný a 0,25% ProClin 300.

Skladování: Reagencie jsou skladovány v lednici ve vzpřímené poloze při teplotě 2-10°C.

Stabilita: Činidla jsou stabilní do vyznačené doby exspirace při 2-8°C, po otevření při 2 – 8°C po dobu 28 dnů. 

Ověřování kvality: Provádí se 1x týdně pomocí interní kontroly kvality.

Způsob likvidace: Likviduje se běžným způsobem podle místních předpisů.

Manipulace s reagenciemi: Reagencie v setu jsou sestaveny tak, že jsou připraveny k použití a nesmí být oddělovány. Všechny informace potřebné pro přesnou činnost jsou načteny automaticky z čárového kódu reagencie.

OSN-SSpotřební materiálOSN-E

81906 Substrate 4x120 ml

386167 Reaction Vessels

A16793 Wash Buffer II box (10 l)

973157 Waste Bags, 20/pack

651412 Access 0,5 ml sample cup

81911 Access Contrad 70

81912 Accesss Citranox

OSN-SPříprava k činnostiOSN-E

Přístroj se uvede do stavu Standby podle pracovní instrukce PI-OKBH-06 Manuál analyzátoru DxI 800. Reagenční set Access TSH (3rd IS) se umístí do vstupu pro reagencie. Stojánek se vzorkem se vloží do vstupní liny.

OSN-SPracovní postupOSN-E

Před začátkem provozu se provede kontrola stavu reagencií a spotřebního materiálu a v případě potřeby se doplní. V případě založení nového reagenčního setu Access TSH (3rd IS) se provede před vlastním měřením vzorků kontrola kvality v kontrolním materiálu Biorad Immunoassay Plus Control na hladině 1, 2 a 3. Vyhovuje-li naměřený výsledek (podrobněji Řízení kvality), je možné přistoupit k zakládání vzorků do přístroje. Vzorky jsou kontrolovány na přítomnost hemolýzy, chylozity a vkládány do analyzátoru v modrých/šedých (podle velikosti zkumavky) stojáncích v primárních zkumavkách s čarovým kódem. Pokud je biologického materiálu málo nebo obsahuje sraženinu, přepipetují se do Access cupu, který se umístí do zeleného stojánku. Analyzátor pomocí systému LIS načte podle čarového kódu potřebné požadavky, provede příslušná stanovení a výsledky vypíše na obrazovku analyzátoru Test Display. Pipetuje se 10 μl vzorku navíc k mrtvému objemu. Výsledná koncentrace je vyhodnocena z kalibrační křivky specifické pro přístroj. Vzorky s koncentrací vyšší než rozsah měření mohou být naředěny Sample Diluent A zvolením metody TSH3d. Výsledky jsou automaticky odesílány do LIS ke schválení, které provádí pověřený pracovník.

V průběhu dne obsluha analyzátoru doplňuje podle potřeby spotřební materiál přístroje: cupy, Wash Buffer, Substrate a případně likviduje odpadní materiál.

Kontrola kvality se provádí 1x týdně, nejčastěji v pondělí, dále po každé kalibraci, při výměně setu stejné šarže a v dalších případech indikovaných vedoucím úseku. Externí kontrola kvality je prováděna 2x ročně.

Kalibrace je prováděna kalibračním materiálem Access TSH (3rd IS) Calibrators, vždy u nové šarže a dále podle potřeby.

Odpadní materiál je průběžně likvidován podle vnitřních hygienických předpisů. Obsluha analyzátoru se řídí vnitřními bezpečnostními a hygienickými  předpisy laboratoře.

OSN-SStručný popis postupuOSN-E

1. Vložit reagenční soupravu

2. Zkontrolovat, zda není potřeba provést novou kalibraci. Pokud ano, provést kalibraci.

3. Vložit analyzované vzorky do analyzátoru.

4. Spustit analýzu.

5. Výsledky testů jsou průběžně z přístroje odesílány do systému LIS, kde jsou kontrolovány.

OSN-SKalibrace a návaznostOSN-E

Ke kalibraci reagenčního setu Access TSH (3rd IS) testu je používán kalibrační set Access TSH (3rd IS) Calibrators, kat.č. B63285, obsahující kalibrační kartu a kalibrační roztoky:

SO: Tlumivý roztok obsahující hovězí sérový albumin (BSA) s povrchově aktivní látkou, azid sodný

< 0,1% a ProClin* 300 0,5%. Osahuje 0 μIU/mL (mlU/L) hTSH.

S1 – S5: Přibližně 0,050, 0,30, 3,0, 15,0 a 50,0 μIU/mL (mIU/L) hTSH, v tlumivém roztoku BSA

s povrchově aktivní látkou, azid sodný < 0,1 % a ProClin 300 0,5 %.

Příprava: Kalibrační roztoky jsou připraveny k použití

Stabilita: Kalibrátor je stabilní do data exspirace uvedeného na obalu, při teplotě skladování 2‑8°C.

Vlastní kalibrace:  Kalibrace se provádí vždy při založení nové šarže reagenčního setu a dále podle potřeby

v souvislosti s vyhodnocováním kontroly kvality. Obsah lahviček před použitím mírně promíchejte. Kalibrátor pipetujte do Access cupů a vložte do zelených stojánků. V  analyzátoru zadejte příslušný požadavek. Vyhodnocení kalibrace zajištěno prostřednictvím softwaru analyzátoru.

Ověření kalibrace: Není nutné. Software analyzátoru automaticky kontroluje validitu křivky a upozorní

na odchylky.           

Návaznost: Analyt v kalibrátorech Access TSH (třetí IS) má metrologickou návaznost na specifikaci WHO 3rd International Standard 81/565.

Způsob dokumentace kalibračních dat: Výsledky každé kalibrace jsou vytištěny a založeny do dokumentace kalibrací DxI.

OSN-SCharakteristika spolehlivostiOSN-E

Charakteristiky spolehlivosti z příbalového letáku:

Měřící rozsah: 0,005 – 50,0 mU/l

Opakovatelnost (přesnost v sérii) CV 2 - 4 % dle hladiny

Reprodukovatelnost (mezi sériemi): CV 2 – 5% dle hladiny

Mez detekce (analytická citlivost): 0,005 mU/l

Porovnání metod: Porovnání 207 hodnot získaných pomocí stanovení Estradiol Access na imunoanalytickém systému Access a za použití komerčně dostupné soupravy pro imunoanalytické stanovení:

· Rozsah měření: 0,01 – 44,9 mU/l

· Úsek: -0,04

· Směrnice: 0,91

· Korelační koeficient (r): 0,99

Aktuální charakteristiky spolehlivosti:

Aktuální charakteristiky spolehlivosti jsou uvedeny v platném verifikačním protokolu TSH pro analyzátor DxI 800.

OSN-SDokumentace, zpracování dat a vydávání výsledkůOSN-E

Výsledky stanovení jsou uloženy v softwaru analyzátoru, další pracovní den jsou ráno před začátkem provozu archivovány na externí disk. Všechny výsledky se také archivují v elektronické formě v laboratorním informačním systému a denně je zálohována hlavní kniha.

Hodnoty výsledků se udávají na tři desetinná místa, v mU/l.

Lékařům na odděleních a ambulancích Vítkovické nemocnice jsou výsledky vyšetření k dispozici v NIS a průběžně ve vytištěné podobě u příjmového okna v laboratoři.

Kooperujícím lékařům jsou výsledky zasílány průběžně elektronicky a následující den doručovány v tištěné podobě se svozem biologického materiálu.

Výsledková zpráva obsahuje:

· identifikaci laboratoře, která výsledek vydala

· odkaz na akreditaci laboratoře

· datum a čas vydání nálezu

· jednoznačnou identifikaci pacienta

· zdravotní pojišťovnu pacienta

· identifikaci požadujícího subjektu (lokalizaci pacienta, je-li to vhodné)

· identifikaci požadujícího lékaře  (resp. oddělení)

· diagnózu pacienta

· druh biologického materiálu (sérum, plazma, moč, krev u vyšetření krevního obrazu)

· jasně srozumitelnou identifikaci vyšetření

· datum a čas přijetí vzorku laboratoří

· datum a čas odběru vzorku

· výsledek vyšetření s odpovídajícími jednotkami (nejčastěji SI jednotky)

· označení akreditované metody

· referenční intervaly vyšetření

· interpretaci výsledků, je-li to nutné

· jiné poznámky (např. kvalita nebo dostatečnost primárního vzorku, pokud tato může nežádoucím způsobem ovlivnit výsledek požadovaného vyšetření)

· identifikaci osob, které výsledkovou zprávu kontrolovaly a schválily

· zkratky identifikující žádanku

· př. 20.BR-0777

· 20: den v měsíci, BR: biochemie rutina, 0777: číslo vzorku

· př. 20.HH-0777

· 20: den v měsíci, HH: hematologie, 0777: číslo vzorku

OSN-SReferenční a varovná rozmezíOSN-E

Referenční rozmezí: 0,380 - 5,330 mIU/l

Postup pro nahlášení kritické hodnoty výsledku laboratorního vyšetření je uveden ve směrnici S-OKBH-012 Směrnice pro vydávání výsledků.

OSN-SInterpretace výsledků, konzultační činnosti a hlášeníOSN-E

Hypofunkce a hyperfunkce štítné žlázy souvisí s poruchami na různých úrovních osy hypotalamus-hypofýza-štítná žláza. Tyto poruchy se pak projevují změnami hladin TSH a tyreoidálních hormonů a také změnami odpovědi TSH na podání exogenního TRH (TSH-TRH test) - viz tabulka: 

Diagnóza	Popis	Koncentrace TSH	Koncentrace T3 a T4	Odpověď TSH na TRH
Primární hypotyreóza	Dysfunkce štítné žlázy		¯	výrazná
Sekundární hypotyreóza	Dysfunkce hypofýzy	« nebo ¯	¯	žádná
Terciární hypotyreóza	Dysfunkce hypotalamu	« nebo ¯	«	slabá opožděná
Hypertyreóza	Toxická uzlová struma Gravesova nemoc	¯		žádná

Popis: zvýšená koncentrace

¯ snížená koncentrace

« normální koncentrace

OSN-SŘízení kvalityOSN-E

Jako kontrolní materiál se používá Liquichek Immunoassay Plus Control firmy Biorad.

Příprava: Kontrolní materiál je uchováván při -20^oC. Po rozmražení a vytemperování na laboratorní teplotu je

připraven k použití.

Stabilita: Kontrolní materiál je stabilní při -20°C do data exspirace vyznačené na obalu. Po rozmražení je

stabilní 4 týdny při +2 až +8°C. Kontrolní materiál není možné opakovaně zamrazovat.

Použití: Měření kontrolního materiálu se provádí denně střídavě na jedné ze tří hladin, dále po každé

kalibraci a při výměně setu stejné šarže. Výsledky jsou kontrolovány pověřeným pracovníkem. Postupuje se podle směrnice S‑OKBH-004 Směrnice pro IKK. Externí kontrola kvality v rámci České republiky je organizována společností SEKK, laboratoř se jí účastní 2x ročně.

Dokumentace: Výsledky interní kontroly kvality jsou uchovávány v softwaru přístroje, denní výsledky jsou

vytištěny a ukládány do dokumentace kontrol DxI 800. Dlouhodobě jsou výsledky IKK sledovány v programu Unity Real Time.

OSN-SPoznámkyOSN-E

nevyplněno

OSN-SJiné související informaceOSN-E

nevyplněno

OSN-SLiteraturaOSN-E

1. SLP
2. Firemní příbalový leták k soupravě. 

OSN-SAppendixyOSN-E

nevyplněno

OSN-SAutorské poznámkyOSN-E

nevyplněno

OSN-SRecenze, schváleníOSN-E

Autor: Mgr. Hana Valentová