Abstrakt
Kvantitativní
stanovení thyrotropinu (TSH) v lidském séru a plazmě metodou
imunoelektrochemiluminiscence soupravou „ECLIA“ na Imunochemickém analyzátoru
Cobas 6000 (e 601 modul).
Seznam
souvisejících dokumentů
Laboratorní příručka
Příručka kvality
Provozní řád
Skartační řád
S-OKBH-003
Směrnice pro práci s biol. mater.
S-OKBH-004
Směrnice pro IKK - OKBH
PI-OKBH-17
Manuál analyzátoru Cobas 6000
Příbalový
leták reagenční soupravy Elecsys TSH
reagent kit, kat.č. 08429324190,
200 testů
Příbalový leták kalibrátoru Elecsys TSH CalSet (kat. č. 08443459190)
Příbalový leták konkrétního
používaného kontrolního materiálu společnosti Biorad, Liquichek™ Immunoassay Plus Control
Kódy, názvy,
definice a terminologie
TSH, thyroidu
stimulující hormon, thyrotropin, tyreotropní hormon, hTSH
Název v lokálním číselníku LIS: Thyreoidální
stimulační hormon TSH_3gen
Klíč v lokálním číselníku LIS:
TSH
Číslo metody
v lokálním číselníku LIS: 72
Kód metody v
analyzátoru e601: 1
Seznam zdravotních
výkonů VZP: 93195
Princip
Sendvičový princip. Celková doba stanovení 18
minut.
1. inkubace: 50 µL vzorku, biotinylovaná
monoklonální protilátka proti TSH a monoklonální protilátka proti TSH, značená
rutheniovým komplexem reagují za tvorby sendvičového komplexu.
2. inkubace: Po přidání mikročástic, potažených streptavidinem, se
komplex váže na pevnou fázi
prostřednictvím
interakce mezi biotinem a streptavidinem.
Reakční směs je nasáta do měřicí komůrky, kde
jsou mikročástice zachyceny magnetickým polem na povrchu elektrody.
Nenavázané složky jsou odstraněny roztokem ProCell. Přivedené napětí na
elektrodě vyvolá chemiluminiscenční emisi fotonů, která je změřena
fotonásobičem.
Výsledky jsou vyhodnoceny z kalibrační
křivky, která je specifická pro přístroj a je vytvářena na základě dvoubodové
kalibrace a základní master kalibrace, dodávané v čarovém kódu reagencie.
Místo provádění
postupu
OKBH, úsek biochemický, Nemocnice AGEL
Ostrava - Vítkovice a.s.,
Zalužanského 1192/15, 703 84 Ostrava-Vítkovice
Bezpečnostní
aspekty
Je
nutné dodržovat obecné zásady bezpečnosti práce podle směrnice S-OKBH-003 Směrnice pro práci s biol. mater.
a směrnic VTN BOZP č.8.02, ale i zásady práce s biologickým materiálem, který
může být zdrojem přenosu některých infekcí. Zejména je třeba zachovávat
pravidla osobní hygieny, používat osobní ochranné pracovní prostředky (oděv,
obuv a podobně), při práci nejíst, nepít a nekouřit. Po práci a před
jídlem omýt pokožku především rukou teplou vodou a mýdlem a ošetřit
vhodným reparačním krémem. Při zasažení očí vymývat velkým množstvím vlažné
vody nejméně 15 minut. Při zasažení oděvu a kůže odložit veškeré kontaminované
oblečení. Okamžitě kůži omýt velkým množstvím, pokud možno vlažné vody, popř.
mýdlem nebo jiným vhodným mycím prostředkem. Při náhodném požití vypláchnout
ústa, dát vypít asi 1/2 litru vody a vyhledat lékařskou pomoc.
Fáze před vyšetřením
Thyroidu stimulující hormon (TSH, thyrotropin) je
glykoprotein s molekulovou hmotností přibližně 30 000 daltonů, skládající
se ze dvou podjednotek, β-podjednotka je nositelem imunologické a
biologické specifiky TSH, kdežto α-řetězec je nositelem druhové
specificity a má shodnou sekvenci aminokyselin s α-řetězcem LH, FSH,
a hCG.
TSH vzniká ve specifických basofilních buňkách přední části hypofýzy a
vykazuje cirkadiánní sekreční rytmus. Uvolňování TSH (thyrotropní hormon) je
centrálním regulačním mechanismem biologické aktivity hormonů štítné žlázy. TSH
má stimulační účinky na všech stupních vytváření a sekrece hormonů štítné
žlázy; má rovněž proliferativní efekt.
Stanovení TSH slouží jako úvodní test diagnostiky štítné žlázy. Každá
velmi malá změna v koncentraci volných thyroidních hormonů přináší mnohem
větší změny hladiny TSH opačného rázu. TSH je tedy velmi citlivým a specifickým
markerem hodnocení funkce štítné žlázy a současně vhodným pro časnou detekci
nebo vyloučení poruch centrální regulační smyčky mezi hypotalamem, hypofýzou a
štítnou žlázou.
Odběr primárního
vzorku a transport
Odběr
Sérum: Odběr se provádí standardním způsobem ze žilní krve, do plastové zkumavky
s aktivátorem srážení nebo se separačním
gelem za použití uzavřeného odběrového systému. Speciální příprava pacienta ani
dieta není nutná, pro obvyklé vyšetřování je vhodný odběr ráno.
Plazma: Li-,
Na-, NH4+ -heparin, K3-EDTA, citran
sodný a fluorid sodný/oxalát draselný.
Transport
Transport
materiálu na oddělení OKBH VTN je popsán ve směrnici S-OKBH-006
Směrnice pro transport a příjem vzorků.
Skladování
Sérum/plazma je
na OKBH po provedení analýzy skladováno v lednici při 2-8°C po dobu 2 dnů pro potřeby dodatečně
požadovaných vyšetření. Doba dodatečně požadovaných vyšetření se řídí podle
seznamu uvedeném v LP C-03 Ústní požadavky na vyšetření.
V případě delšího skladování pro potřebu analýzy, je sérum/plazma
skladováno zamraženo při teplotě -20°C po dobu maximálně 1 měsíce.
Interference
Stanovení neovlivňuje hemolýza (koncentrace
hemoglobinu < 1,0 g/dl), koncentrace bilirubinu
(< 701 μmol/l), lipémie (< 1500 mg/dl), koncentrace
biotinu (< 25 ng/ml). Interference nebyla zaznamenána od revmatoidních
faktorů do koncentrace 3250 IU/ml.
Stabilita měřené veličiny
v séru
+20 až
+25°C: 24 hodin, +4 až +8°C: 3 dny, -20°C: 3 měsíce, zamrazit
pouze jednou, nerozmrazovat při vysoké teplotě.
Omezení
Laboratoř
může odmítnout přijetí materiálu a neprovést požadované vyšetření
z obecných důvodů uvedených v Laboratorní příručce v kapitole
Kritéria pro přijetí nebo odmítnutí primárních vzorků. Vzorky, které byly
stabilizovány azidem sodným, nemohou být použity. Zvláštní pozornost je třeba
věnovat pacientům léčeným biotinem, myšími monoklonálními protilátkami a
pacientům s vysokým titrem protilátek proti rutheniu. U pacientů, kteří
dostávají vysoké dávky biotinu (např. >5 mg/den), mohou být vzorky odebrány
nejdříve za 8 hodin po podání poslední dávky biotinu.
Manipulace se vzorky
Manipulace se vzorky probíhá podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem uvedených
v Laboratorní příručce a Příručce kvality.
Primární zkumavka s biologickým
materiálem je centrifugována 10 minut při 4000 otáčkách za minutu. Po centrifugaci je odeslána k
analýze. Vzorky obsahující sraženinu musí být
před analýzou opět centrifugovány.
Po ukončení všech analýz je zkumavka umístěna na příslušné místo
v archivu v lednici.
Nepoužívají
se vzorky tepelně inaktivované.
Přístroje a
pomůcky
Centrifuga
Imunochemický analyzátor firmy Roche Cobas e601
Reagencie
Elecsys TSH reagent kit, kat.č. 08429324190, 200 testů
Výrobce soupravy: Roche diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116,
D-68305 Mannheim
Dodavatel soupravy: Roche
s.r.o., Diagnostics Division, Na Valentince 3336/4,
150 00 Praha
M Mikročástice potažené streptavidinem
(průsvitné víčko), 1 nádobka, 12 ml: Mikročástice potažené streptavidinem 0,72
mg/ml, vazebná kapacita 470 ng biotinu/mg mikročástic, konzervační látka.
R1 Anti-TSH-Ab~biotin (šedé víčko), 1 nádobka,
14 ml: Biotinylovaná monoklonální protilátka proti TSH (myší) 2,0 mg/l;
fosfátový pufr 100 mmol/l; pH 7,2; konzervační látka.
R2 TSH-Ab~Ru(bpy)2+ Monoklonální
protilátka proti TSH (myší/lidská) značená rutheniovým komplexem 1,2 mg/L;
fosfátový pufr 100 mmol/l; pH 7,2, konzervační látka.
Skladování: Reagencie jsou skladovány v lednici ve vzpřímené
poloze při teplotě +2 až +8°C.
Před založením
do přístroje jsou 1 hodinu temperovány při laboratorní teplotě.
Stabilita: Činidla jsou stabilní do vyznačené doby exspirace
při +2 až +8°C, po otevření při +2 až +8°C
po dobu 12 týdnů, po
založení do přístroje po dobu 6 týdnů.
Ověřování kvality: Provádí se denně pomocí interní kontroly kvality.
Způsob likvidace: Likviduje se běžným způsobem podle místních předpisů.
Manipulace s reagenciemi: Reagencie v setu jsou sestaveny
tak, že jsou připraveny k použití a nesmí být
oddělovány.
Všechny informace potřebné pro přesnou činnost jsou načteny automaticky
z čárového kódu reagencie.
Spotřební
materiál
04880340
ProCell M, 2x2l systémový pufr
04880293
CleanCell M, 2x2l čistící roztok pro měřící komůrku
03005712 ProbeWash
M, 12x70 ml čistícího roztoku pro finalizaci a mytí během změny reagencií
12102137
Assay Cups/Assay Tips Combimagazine M, 48 palet: 84 reakčních nádobek a pipetovacích
špiček, odpadní vaky
03004899 PreClean M
Příprava k činnosti
Přístroj se uvede do
stavu Standby podle pracovní instrukce PI-OKBH-17 Manuál analyzátoru Cobas e601.
Provede se údržba požadovaná softwarem přístroje. Vytemperovaný reagenční set
Elecsys TSH se umístí do reagenčního kruhu a uvolní se uzávěry do pracovní
polohy.
Pracovní postup
Před začátkem provozu se provede
kontrola stavu reagencií a spotřebního materiálu a v případě potřeby se
doplní. V případě založení nového reagenčního setu TSH se provede před
vlastním měřením vzorků kontrola kvality v kontrolním materiálu Biorad
Immunoassay Plus Control na hladině 1, 2 a 3. Vyhovuje-li naměřený výsledek
(podrobněji Řízení kvality), je možné přistoupit k zakládání vzorků do
přístroje. Vzorky jsou kontrolovány na přítomnost hemolýzy, chylozity a
vkládány do analyzátoru v šedých stojáncích v primárních zkumavkách
s čárovým kódem. Pokud je biologického materiálu málo nebo obsahuje
sraženinu, přepipetují se do Hitachi cupu, který se umístí na zkumavku
s čárovým kódem. Analyzátor pomocí systému LIS načte podle čárového kódu
potřebné požadavky, provede příslušná stanovení a výsledky vypíše na obrazovku
analyzátoru Workplace.
Pipetuje se 49 μl vzorku.
Výsledná koncentrace je vyhodnocena z kalibrační křivky specifické pro
přístroj. Vzorky s koncentrací vyšší než rozsah měření, mohou být naředěny
dilučním roztokem Diluent MultiAssay. Doporučený poměr ředění je 1:10. Výsledky
jsou automaticky odesílány do LIS ke kontrole a schválení, které provádí pověřený pracovník.
V průběhu dne obsluha analyzátoru doplňuje spotřební materiál přístroje -
špičky a cupy, roztoky ProCell, ClenCell, PreClean, ProbeWash a likviduje
odpadní materiál.
Kontrola
kvality se provádí denně, dále po každé kalibraci, při výměně setu stejné šarže
a v dalších případech indikovaných vedoucím úseku.
Kalibrace
je prováděna kalibračním materiálem TSH CalSet firmy Roche, vždy u nové šarže a
dále podle potřeby.
Odpadní
materiál (špičky a microcupy) je průběžně likvidován podle vnitřních
hygienických předpisů. Obsluha analyzátoru se řídí vnitřními bezpečnostními a
hygienickými předpisy laboratoře a pracovní instrukcí
PI-OKBH-17 Manuál
analyzátoru Cobas e601.
Stručný popis postupu
1. Vloží se reagenční souprava
2.
V případě
potřeby se provede kalibrace.
3.
Provede se
kontrola kvality
4.
Vloží se analyzované vzorky do analyzátoru.
5.
Spustí se
analýza.
6. Výsledky
testů jsou průběžně z přístroje odesílány do systému Openlims, kde jsou
kontrolovány.
Kalibrace a
návaznost
Ke kalibraci Elecsys TSH testu je používán 2.IRP
WHO referenční standard 80/558. Každý TSH reagent set je označen čárovým kódem,
který obsahuje specifické informace potřebné pro kalibraci jednotlivých šarží
reagencií. Předdefinovaná kalibrační master křivka je adaptována na daný
analyzátor použitím Elecsys TSH CalSet (kat. č. 1731483), který obsahuje
koňskou sérovou matrici s přídavkem rekombinantního TSH ve dvou
rozmezích koncentrace.
Příprava: Kalibrátory jsou připraveny k použití v nádobkách
kompatibilních se systémem.
Stabilita: Kalibrátor je stabilní do data exspirace uvedeného na obalu, při teplotě
skladování +2 až +8°C.
Vlastní
kalibrace: Kalibrace se provádí vždy
při založení nové šarže kazety a dále podle potřeby
v souvislosti s vyhodnocováním
kontroly kvality. Nádobky s roztoky Cal1 a Cal2 se založí do černého stojánku
do předdefinovaných pozic, nechají vytemperovat na teplotu +2 až +-25°C,
v analyzátoru se zadá příslušný požadavek a odstartuje kalibrace. Výpočet
je zajištěn prostřednictvím softwaru analyzátoru
Ověření
kalibrace: Není nutné. Software analyzátoru automaticky kontroluje validitu
křivky a upozorní
na jakékoliv odchylky.
Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle 2. IRP WHO referenčního standardu
80/558.
Způsob
dokumentace kalibračních dat: Hodnoty
kalibrací se uchovávají v paměti přístroje. Výsledky každé
kalibrace jsou vytištěny a založeny
do dokumentace kalibrací.
Charakteristika
spolehlivosti
Charakteristiky spolehlivosti z příbalového letáku:
Měřící
rozsah:
0,005-100,0 µIU/ml
Funkční citlivost: 0,014 µIU/ml
Opakovatelnost (přesnost
v sérii): CV 1,1 – 3,0 %
dle hladiny
Mezilehlá
preciznost (mezi sériemi): CV 3,2 –
7,2 % dle hladiny
Mez detekce (analytická citlivost): 0,005 µIU/ml
Mez stanovitelnosti: 0,015 µIU/ml
Analytická
specifita - zkřížená reaktivita:
Pro použité monoklonální protilátky byla shledána následující křížová
reaktivita:
LH 0,038 %, FSH 0,008 %; hGH a hCG bez zkřížené reaktivity.
Porovnání metod:
Elescys TSH (y) x Enzymun-Test TSH
(x) (n=109)
Passing/Bablok Lineární regrese
y=1,01x+0,01 y=0,98x+0,04
T=0,944 r=0,993
SD (md68)
=0,60 Sy.x=0,261
Koncentrace vzorků se pohybovala
v rozmezí přibližně 0 až 19 µIU/ml.
Aktuální
charakteristiky spolehlivosti:
Aktuální
charakteristiky spolehlivosti jsou uvedeny v platném verifikačním
protokolu TSH.
Dokumentace, zpracování dat a vydávání výsledků
Hodnoty výsledků
se udávají na dvě desetinná místa v mU/l.
Lékařům na odděleních a ambulancích
Nemocnice Agel Ostrava Vítkovice a.s. jsou výsledky vyšetření k dispozici
elektronicky v NIS a v případě potřeby v tištěné podobě u
příjmového okna v laboratoři.
Spolupracujícím lékařům jsou výsledky
zasílány průběžně elektronicky a
následující den doručovány v tištěné podobě
se svozem biologického materiálu.
Výsledková zpráva obsahuje:
·
identifikaci
laboratoře, která výsledek vydala
·
odkaz na akreditaci laboratoře
·
datum
a čas vydání nálezu
·
jednoznačnou
identifikaci pacienta
·
zdravotní pojišťovnu pacienta
·
identifikaci požadujícího subjektu (lokalizaci pacienta, je-li to vhodné)
·
identifikaci požadujícího lékaře (resp.
oddělení)
·
diagnózu pacienta
·
druh biologického materiálu (sérum, plazma, moč,
krev u vyšetření krevního obrazu)
·
jasně
srozumitelnou identifikaci vyšetření
·
datum a čas přijetí vzorku laboratoří
·
datum a čas odběru vzorku
·
výsledek vyšetření s odpovídajícími
jednotkami (nejčastěji SI jednotky)
·
označení akreditované metody
·
referenční intervaly vyšetření
·
interpretaci
výsledků, je-li to nutné
·
jiné poznámky (např. kvalita nebo dostatečnost
primárního vzorku, pokud tato může nežádoucím způsobem ovlivnit výsledek
požadovaného vyšetření)
·
identifikaci osob, které výsledkovou zprávu
kontrolovaly a schválily
·
zkratky identifikující žádanku
·
př. 20.BR-0777
·
20: den v měsíci, BR: biochemie rutina,
0777: číslo vzorku
·
př. 20.HH-0777
·
20: den v měsíci, HH: hematologie, 0777:
číslo vzorku
Referenční a
varovná rozmezí
Referenční rozmezí: 0,270 - 4,200
mIU/l
Postup pro nahlášení kritické
hodnoty výsledku laboratorního vyšetření je uveden ve směrnici S-OKBH-012 Směrnice pro vydávání výsledků.
Interpretace
výsledků, konzultační činnosti a hlášeníOSN-E
Hypofunkce a hyperfunkce štítné žlázy souvisí s poruchami
na různých úrovních osy hypotalamus-hypofýza-štítná žláza. Tyto poruchy se pak
projevují změnami hladin TSH a tyreoidálních hormonů a také změnami odpovědi
TSH na podání exogenního TRH (TSH-TRH test) - viz tabulka:
|
Diagnóza |
Popis |
Koncentrace TSH |
Koncentrace T3 a T4 |
Odpověď TSH na TRH |
|
Primární hypotyreóza |
Dysfunkce štítné žlázy |
|
¯ |
výrazná |
|
Sekundární hypotyreóza |
Dysfunkce hypofýzy |
« nebo ¯ |
¯ |
žádná |
|
Terciární hypotyreóza |
Dysfunkce hypotalamu |
« nebo ¯ |
« |
slabá opožděná |
|
Hypertyreóza |
Toxická uzlová struma Gravesova
nemoc |
¯ |
|
žádná |
Popis: zvýšená koncentrace
¯ snížená koncentrace
« normální
koncentrace
Řízení kvality
Jako kontrolní materiál se používá Liquichek Immunoassay Plus Control
firmy Biorad.
Připrava: Kontrolní materiál je skladován v mrazničce při teplotě –20oC.
Před vlastním použití se nechá
vytemperovat na laboratorní teplotu.
Měření se provádí v Hitachi cupech v bílém stojánku, pipetuje se 400 μl. Rozmražený kontrolní
materiál se skladuje v lednici při teplotě +2 až +8°C 1 měsíc.
Stabilita: Zmražený kontrolní materiál je stabilní při –20oC do data
exspirace vyznačené na obalu.
Po rozmražení je stabilní
1 měsíc při teplotě +2 až +8°C.
Použití: Měření kontrolního materiálu se provádí denně střídavě
na jedné ze tří hladin, dále po každé
kalibraci a při výměně setu stejné šarže. Výsledky jsou kontrolovány pověřeným pracovníkem. Postupuje se podle směrnice
S‑OKBH-004
Směrnice pro IKK. Externí kontrola kvality v rámci České republiky
je organizována společností SEKK, laboratoř se jí účastní 2x ročně.
Dokumentace: Výsledky interní kontroly kvality jsou uchovávány
v softwaru přístroje, zálohovány na externí
disk a elektronicky přenášeny do programu LIS a Unity Real Time. Kontrola
kvality je v LIS rovněž validována vedoucí úseku.
Poznámky
nevyplněno
Jiné související
informace
nevyplněno
Literatura
Appendixy
nevyplněno
Autorské
poznámky
nevyplněno
Recenze,
schválení
Autor: Mgr. Hana Valentová