OSN-SAbstraktOSN-E

Kvantitativní stanovení trijodtyroninu (T3) v lidském séru a plazmě metodou imunoelektrochemiluminiscence soupravou „ECLIA“ na Imunochemickém analyzátoru Cobas 6000.

 

OSN-SSeznam souvisejících dokumentůOSN-E

Laboratorní příručka

Příručka kvality

Provozní řád

Skartační řád 

S-OKBH-003 Směrnice pro práci s biol. mater.

S-OKBH-004 Směrnice pro IKK - OKBH

S-OKBH-005 Směrnice EHK

 PI-OKBH-17 Manuál analyzátoru Cobas 6000

Příbalový leták Roche Elecsys T3, kat. č. 11731360

Příbalový leták Roche Elecsys T3 CalSet, kat. č. 11731548

Příbalový leták konkrétního používaného kontrolního materiálu společnosti Biorad, Liquichek™ Immunoassay Plus Control

 

OSN-SKódy, názvy, definice a terminologieOSN-E

T3, TT3, trijodtyronin celkový

Název v lokálním číselníku LIS: Triiodthyronin-celkový

Klíč v lokálním číselníku LIS: T3

Číslo metody v lokálním číselníku LIS: 70

Kód metody v analyzátoru: 7

Seznam zdravotních výkonů VZP: 93185

 

OSN-SPrincipOSN-E

Princip kompetice. Celková doba stanovení: 18 minut.

 

OSN-SMísto provádění postupuOSN-E

OKBH, úsek biochemický, Vítkovická nemocnice a.s., Zalužanského 1192/15, 703 84 Ostrava-Vítkovice

 

OSN-SBezpečnostní aspektyOSN-E

Je nutné dodržovat obecné zásady bezpečnosti práce podle směrnice S-OKBH-003 Směrnice pro práci s biol. mater. a směrnic VTN BOZP č.8.02, ale i zásady práce s biologickým materiálem, který může být zdrojem přenosu některých infekcí. Zejména je třeba zachovávat pravidla osobní hygieny, používat osobní ochranné pracovní prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci nejíst, nepít a nekouřit. Po práci a před jídlem omýt pokožku především rukou teplou vodou a mýdlem a ošetřit vhodným reparačním krémem. Při zasažení očí vymývat velkým množstvím vlažné vody nejméně 15 minut. Při zasažení oděvu a kůže odložit veškeré kontaminované oblečení. Okamžitě kůži omýt velkým množstvím, pokud možno vlažné vody, popř. mýdlem nebo jiným vhodným mycím prostředkem. Při náhodném požití vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru vody a vyhledat lékařskou pomoc.

 

OSN-SFáze před vyšetřenímOSN-E

Trijodthyronin (T3) je hormon odpovědný hlavně za projevy a účinky hormonů štítné žlázy v různých cílových orgánech. T3 (3,5,3’- trijodthyronin) je vytvářen především extrathyroidálně, zejména v játrech, enzymatickou 5’-dejodací T4. Proto je koncentrace T3 v séru především více výsledkem funkčního stavu periferních tkání než sekreční schopnosti štítné žlázy. Utlumení konverze T4 na T3 má za následek snížení koncentrace T3. Toho lze dosáhnout účinkem léčiv, jako jsou propanolol, glukokortikoidy nebo amiodaron a vyskytuje se při nethyroidálních onemocněních (NTI), nazývaných "syndrom nízkého T3". Stejně jako T4 je přes 99 % T3 vázáno na transportní proteiny. Nicméně afinita T3 k nim je přibližně 10x nižší. Stanovení T3 je využíváno při diagnostice T3 hyperthyroidismu, detekci raných stádií hyperthyroidismu a pro indikaci a diagnostiku navozených thyrotoxikóz.

 

OSN-SOdběr primárního vzorku a transportOSN-E

Odběr

Sérum: Odběr se provádí standardním způsobem ze žilní krve, do plastové zkumavky

s aktivátorem srážení nebo se separačním gelem za použití uzavřeného odběrového systému. Speciální příprava pacienta ani dieta není nutná, pro obvyklé vyšetřování je vhodný odběr ráno.

Plazma: Li-, Na-, NH4+ -heparin, K3-EDTA, citran sodný a fluorid sodný/oxalát draselný.

Transport

Transport materiálu na oddělení OKBH VN je popsán ve směrnici S-OKBH-006 Směrnice pro transport a příjem vzorků.

Skladování

Sérum/plazma je na OKBH po provedení analýzy skladováno v lednici při 2-8°C po dobu 2 dnů pro potřeby dodatečně požadovaných vyšetření. Doba dodatečně požadovaných vyšetření se řídí podle seznamu uvedeném v LP C-03 Ústní požadavky na vyšetření. V případě delšího skladování pro potřebu analýzy, je sérum/plazma skladováno zamraženo při teplotě -20°C po dobu maximálně 1 měsíce.

Interference

Stanovení neovlivňuje hemolýza (koncentrace hemoglobinu < 2,0 g/dl), koncentrace bilirubinu (< 599 μmol/l), lipémie (< 1800 mg/dl), koncentrace biotinu (< 1200 ng/ml). Interference nebyla zaznamenána od revmatoidních faktorů do koncentrace 1500 IU/ml.

Stabilita měřené veličiny v séru

+20 až +25°C: 2 dny, +4 až +8°C: 8 dní, -20°C: 3 měsíce, zamrazit pouze jednou, nerozmrazovat při vysoké teplotě.

 

OSN-SOmezeníOSN-E

Laboratoř může odmítnout přijetí materiálu a neprovést požadované vyšetření z obecných důvodů uvedených v Laboratorní příručce v kapitole Kritéria pro přijetí nebo odmítnutí primárních vzorků. Vzorky, které byly stabilizovány azidem sodným, nemohou být použity. Zvláštní pozornost je třeba věnovat pacientům léčeným biotinem, myšími monoklonálními protilátkami a pacientům s vysokým titrem protilátek proti rutheniu. U pacientů, kteří dostávají vysoké dávky biotinu (např. >5 mg/den), mohou být vzorky odebrány nejdříve za 8 hodin po podání poslední dávky biotinu.

 

OSN-SManipulace se vzorkyOSN-E

Manipulace se vzorky probíhá podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem uvedených v Laboratorní příručce a Příručce kvality.

Primární zkumavka s biologickým materiálem je centrifugována 10 minut při 4 000 ot/min. Po centrifugaci je odeslána k analýze. Vzorky obsahující sraženinu musí být před analýzou opět centrifugovány. 

OSN-SPřístroje a pomůckyOSN-E

Centrifuga

Imunochemický analyzátor firmy Roche Cobas 6000OSN-E

 

OSN-SReagencieOSN-E

Elecsys T3 reagent kit, kat.č. 11731360 - 200 testů

Výrobce soupravy: Roche diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim

Dodavatel soupravy: Roche s.r.o., Diagnostics division, Na Valentince 3336/4, 150 00 Praha

 

M            Mikročástice potažené streptavidinem (průsvitné víčko), 1 nádobka, 12 ml: Mikročástice potažené streptavidinem 0,72 mg/ml, vazebná kapacita 470 ng biotinu/mg mikročástic, konzervační látka.

R1          Anti-T3-Ab~Ru(bpy)2+ (šedé víčko), 1 nádobka, 16 mL: Polyklonální protilátka proti T3 (ovčí) značená rutheniovým komplexem 75 ng/ml; ANK 0,8 mg/ml; fosfátový pufr 100 mmol/l, pH 7,4; konzervační látka.

R2          biotin (černé víčko), 1 nádobka, 16 ml: Biotinylovaná T3 3 ng/ml; ANK 0,8 mg/ml; fosfátový pufr 100 mmol/l, pH 7,4; konzervační látka.

Skladování: Reagencie jsou skladovány v lednici ve vzpřímené poloze při teplotě +2 až +8°C.

Před založením do přístroje jsou 1 hodiny temperovány při laboratorní teplotě.

Stabilita: Činidla jsou stabilní do vyznačené doby exspirace při +2 až +8°C, po otevření při +2 až +8°C

po dobu 12 týdnů, po založení do přístroje po dobu 8 týdnů. 

Ověřování kvality: Provádí se denně pomocí interní kontroly kvality.

Způsob likvidace: Likviduje se běžným způsobem podle místních předpisů.

Manipulace s reagenciemi: Reagencie v setu jsou sestaveny tak, že jsou připraveny k použití a nesmí být

oddělovány. Všechny informace potřebné pro přesnou činnost jsou načteny automaticky z čárového kódu reagencie.

 

OSN-SSpotřební materiálOSN-E

04880340 ProCell M, 2x2l systémový pufr

04880293 CleanCell M, 2x2l čistící roztok pro měřící komůrku

03005712 ProbeWash M, 12x70 ml čistícího roztoku pro finalizaci a mytí během změny reagencií

12102137 Assay Cups/Assay Tips Combimagazine M, 48 palet: 84 reakčních nádobek a pipetovacích špiček, odpadní vaky

03004899 PreClean M

 

OSN-SPříprava k činnostiOSN-E

Přístroj se uvede do stavu Standby podle pracovní instrukce   PI-OKBH-17 Manuál analyzátoru Cobas 6000. Provede se údržba požadovaná softwarem přístroje. Vytemperovaný reagenční set Elecsys T3 se umístí do reagenčního kruhu a uvolní se uzávěry do pracovní polohy.

OSN-SPracovní postupOSN-E

Před začátkem provozu se provede kontrola stavu reagencií a spotřebního materiálu a v případě potřeby se doplní. V případě založení nového reagenčního setu T3 se provede před vlastním měřením vzorků kontrola kvality v kontrolním materiálu Biorad Immunoassay Plus Control na hladině 1, 2 a 3. Vyhovuje-li naměřený výsledek (podrobněji Řízení kvality), je možné přistoupit k zakládání vzorků do přístroje. Vzorky jsou kontrolovány na přítomnost hemolýzy, chylozity a vkládány do analyzátoru v šedých stojáncích v primárních zkumavkách s čárovým kódem. Pokud je biologického materiálu málo nebo obsahuje sraženinu, přepipetuje se do Hitachi cupu, který se umístí na zkumavku s čárovým kódem. Analyzátor pomocí systému LIS načte podle čárového kódu potřebné požadavky, provede příslušná stanovení a výsledky vypíše na obrazovku analyzátoru Workplace. Pipetuje se 30 μl vzorku. Výsledná koncentrace je vyhodnocena z kalibrační křivky specifické pro přístroj. Vzorky s koncentrací vyšší než rozsah měření, mohou být naředěny dilučním roztokem Diluent Universal. Doporučený poměr ředění je 1:50. Výsledky jsou automaticky odesílány do LIS kontrole a schválení, které provádí pověřený pracovník.

V průběhu dne obsluha analyzátoru doplňuje spotřební materiál přístroje - špičky a cupy, roztoky ProCell, ClenCell, PreClean, ProbeWash a likviduje odpadní materiál.

Kontrola kvality se provádí denně, dále po každé kalibraci, při výměně setu stejné šarže a v dalších případech indikovaných vedoucím úseku.

Kalibrace je prováděna kalibračním materiálem T3 CalSet firmy Roche, vždy u nové šarže a dále podle potřeby.

Odpadní materiál (špičky a microcupy) je průběžně likvidován podle vnitřních hygienických předpisů. Obsluha analyzátoru se řídí vnitřními bezpečnostními a hygienickými předpisy laboratoře a pracovní instrukcí PI-OKBH-17 Manuál analyzátoru Cobas 6000.

 

OSN-SStručný popis postupuOSN-E

1.       Vloží se reagenční souprava

2.       V případě potřeby se provede kalibrace.

3.       Vloží se analyzované vzorky do analyzátoru.

4.       Spustí se analýza.

5.       Výsledky testů jsou průběžně z přístroje odesílány do systému Openlims, kde jsou kontrolovány. OSN-E

 

OSN-SKalibrace a návaznostOSN-E

Ke kalibraci Elecsys T3 je používán T3 CalSet (kat. č. 11731548), obsahující lyofilizované lidské sérum ve dvou koncentracích. Každý T3 reagent CalSet je označen čárovým kódem, který obsahuje specifické informace potřebné pro kalibraci jednotlivých šarží reagencií. Předdefinovaná kalibrační master křivka je adaptována na daný analyzátor použitím Elecsys T3 CalSet

Příprava: Kalibrátor je lyofilizovaný. Po opatrném otevření lahvičky, aby se zabránilo jakékoliv ztrátě

lyofilizátu, se přidá přesně 1 ml deionizované vody. Lahvička se pečlivě uzavře a obsah se rozpustí během 30 minut, za občasného opatrného promíchání kroužením lahvičky tak, aby se zabránilo pěnění. Netřepe se. Po dokonalém rozpuštění se kontroly rozpipetují po 250 µl do zkumavek Eppendorf a zamrazí se při –20°C pro pozdější použití. Před vlastním použití se ponechá již zmrazený kalibrační materiál vytemperovat na laboratorní teplotu, teprve po té je možné jej použít

Stabilita: Kalibrátor je stabilní do data exspirace uvedeného na obalu, při teplotě skladování +2 až +8°C,

po rozpuštění 8 týdnů při teplotě +2 až +8°C.

Vlastní kalibrace: Kalibrace se provádí vždy při založení nové šarže kazety a dále podle potřeby

v souvislosti s vyhodnocováním kontroly kvality. Nádobky s roztoky Cal1 a Cal2 se založí do černého stojánku do předdefinovaných pozic, nechají vytemperovat na teplotu +20 – +25°C, v analyzátoru se zadá příslušný požadavek a odstartuje kalibrace. Výpočet je zajištěn prostřednictvím softwaru analyzátoru

Návaznost: Tato metoda byla standardizována rovnovážnou dialýzou.

Způsob dokumentace kalibračních dat: Hodnoty kalibrací se uchovávají v paměti přístroje. Výsledky každé

kalibrace jsou vytištěny a založeny do dokumentace kalibrací.

 

OSN-SCharakteristika spolehlivostiOSN-E

Charakteristiky spolehlivosti z příbalového letáku:

Měřící rozsah: 0,300-10,00 nmol/l

Opakovatelnost (přesnost v sérii): CV 1,3 – 3,1 % dle hladiny

Mezilehlá preciznost (mezi sériemi): CV 3,4 – 4,5 % dle hladiny

Mez detekce (analytická citlivost): 0,300 nmol/l

Mez stanovitelnosti: 0,900 nmol/l

Analytická specifita - zkřížená reaktivita:

Pro použité deriváty protilátek byla shledána následující křížová reaktivita:

D-T3 100 %; L-T4 <0,16 %; D-T4 <0,16 %; L-rT3 <0,04 %; L-T2 <1,0 %; 3,3’,5-trijodtyrooctová kyselina 106 %; 3,3’,5,5’-tetrajodtyrooctová kyselina <0,01 %.

Autoprotilátky proti hormonům štítné žlázy mohou ovlivňovat stanovení.

Anomálie vazebních bílkovin u FDH mohou způsobovat hodnoty lišící se od očekávaných výsledků.

Porovnání metod:

Elescys T3 (y) x Enzymun-Test T3 (x) (n=300)

Passing/Bablok                      Lineární regrese

y=1,26x-0,56                          y=1,18x-0,35

T=0,754                                   r=0,957

Koncentrace vzorků se pohybovala v rozmezí přibližně 0,5 až 9 nmol/l.

 

Aktuální charakteristiky spolehlivosti:

Aktuální charakteristiky spolehlivosti jsou uvedeny v platném verifikačním protokolu T3.

 

OSN-SDokumentace, zpracování dat a vydávání výsledkůOSN-E

Výsledky stanovení jsou uloženy v softwaru analyzátoru, další pracovní den jsou ráno před začátkem provozu archivovány na externí disk. Všechny výsledky se také archivují v elektronické formě v laboratorním informačním systému.

Hodnoty výsledků se udávají na dvě desetinná místa v nmol/l.

 

Lékařům na odděleních a ambulancích Nemocnice Agel Ostrava Vítkovice a.s. jsou výsledky vyšetření k dispozici elektronicky v NIS a v případě potřeby v tištěné podobě u příjmového okna v laboratoři.

 

Spolupracujícím lékařům jsou výsledky zasílány průběžně elektronicky a následující den doručovány v tištěné podobě se svozem biologického materiálu.

 

Výsledková zpráva obsahuje:

·         identifikaci laboratoře, která výsledek vydala

·         odkaz na akreditaci laboratoře

·         datum a čas vydání nálezu

·         jednoznačnou identifikaci pacienta

·         zdravotní pojišťovnu pacienta

·         identifikaci požadujícího subjektu (lokalizaci pacienta, je-li to vhodné)

·         identifikaci požadujícího lékaře (resp. oddělení)

·         diagnózu pacienta

·         druh biologického materiálu (sérum, plazma, moč, krev u vyšetření krevního obrazu)

·         jasně srozumitelnou identifikaci vyšetření

·         datum a čas přijetí vzorku laboratoří

·         datum a čas odběru vzorku

·         výsledek vyšetření s odpovídajícími jednotkami (nejčastěji SI jednotky)

·         označení akreditované metody

·         referenční intervaly vyšetření

·         interpretaci výsledků, je-li to nutné

·         jiné poznámky (např. kvalita nebo dostatečnost primárního vzorku, pokud tato může nežádoucím způsobem ovlivnit výsledek požadovaného vyšetření)

·         identifikaci osob, které výsledkovou zprávu kontrolovaly a schválily

·         zkratky identifikující žádanku

·         př. 20.BR-0777

·         20: den v měsíci, BR: biochemie rutina, 0777: číslo vzorku

·         př. 20.HH-0777

·         20: den v měsíci, HH: hematologie, 0777: číslo vzorku

 

OSN-SReferenční a varovná rozmezíOSN-E

Referenční rozmezí:

·         Ženy nad 20 let: 1,20 – 2,92 nmol/l

·         Muži nad 20 let: 1,28 – 2,92 nmol/l

·         6D – 3M: 1,23 -4,22 nmol/l

·         3M - 1: 1,32 -4,07 nmol/l

·         1 - 6: 1,42 – 3,80 nmol/l

·         6 – 11: 1,43 – 3,55 nmol/l

·         11 – 20: 1,40 – 3,34 nmol/l

 

OSN-SInterpretace výsledků, konzultační činnosti a hlášeníOSN-E

3,5,3’-trijodtyronin (T3) je tyreoidální hormon o molekulové hmotnosti 651 daltonů, jehož biologický poločas Klinický význam stanovení celkového T3 v séru spočívá v diagnóze poruch štítné žlázy.

Hladina koncentrací T3 v séru nebo v plazmě je nejcitlivějším testem hypertyreoidismu u pacientů, i když samotné stanovení tohoto hormonu nestačí. Diagnostickou účinnost stanovení T3 lze zlepšit současným stanovením celkového tyroxinu a TSH a stanovení hladin volných hormonů fT3 a fT4.

Hladiny T3 bývají rovněž ovlivněny podmínkami, při nichž se mění koncentrace TBG. Tak se lehce zvýšené hladiny T3 mohou objevit během těhotenství, při léčbě estrogeny, zatímco snížené lze nalézt při vážných onemocněních, malnutrici, renálním selhání, a při terapii léky potlačujícími činnost štítné žlázy.

Všeobecně zvýšená je hladina T3 a T4 je u dětí.OSN-E

OSN-E

OSN-SŘízení kvalityOSN-E

Jako kontrolní materiál se používá Liquichek Immunoassay Plus Control firmy Biorad.

Příprava: Kontrolní materiál je skladován v mrazničce při teplotě –20oC. Před vlastním použití se nechá

vytemperovat na laboratorní teplotu. Měření se provádí v Hitachi cupech v bílém stojánku. Rozmražený kontrolní materiál se skladuje v lednici při teplotě +2 až +8°C 14 dní.

Stabilita: Zmražený kontrolní materiál je stabilní při –20oC do data exspirace vyznačené na obalu.

Po rozmražení je stabilní 1 měsíc při teplotě +2 až +8°C.

Použití: Měření kontrolního materiálu se provádí denně střídavě na jedné ze tří hladin, dále po každé

kalibraci a při výměně setu stejné šarže. Výsledky jsou kontrolovány pověřeným pracovníkem. Postupuje se podle směrnice S-OKBH-004 Směrnice pro IKK. Externí kontrola kvality v rámci České republiky je organizována společností SEKK, laboratoř se jí účastní 2x ročně.

Dokumentace: Výsledky interní kontroly kvality jsou uchovávány v softwaru přístroje, zálohovány na externí

disk a elektronicky přenášeny do programu LIS a Unity Real Time. Kontrola kvality je v LIS rovněž validována vedoucí úseku.

 

OSN-SPoznámkyOSN-E

nevyplněno

 

OSN-SJiné související informaceOSN-E

nevyplněno

 

OSN-SLiteraturaOSN-E

 

OSN-SAppendixyOSN-E

nevyplněno

 

OSN-SAutorské poznámkyOSN-E

nevyplněno

 

OSN-SRecenze, schváleníOSN-E

Autor: Mgr. Hana Valentová