OSN-SAbstraktOSN-E

Kvantitativní stanovení koncentrace C-reaktivního proteinu (CRP) v séru, plazmě imunoturbidimetrickým testem soupravou  CRP4 latex firmy ROCHE na biochemickém analyzátoru Roche Cobas 6000 modul c501.

 

OSN-SSeznam souvisejících dokumentůOSN-E

Laboratorní příručka

Příručka kvality

Provozní řád

 S-OKBH-004 Směrnice pro IKK

S-OKBH-005 Směrnice EHK

S-OKBH-019 Verifikace postupů měření

PI-OKBH-18 Manuál analyzátoru Cobas c501/6000

Příbalový leták Roche pro stanovení CRP, CRP4katalogové číslo: 007876033190

Příbalový leták Roche pro Calibrator f.a.s.Proteins, kat.č. REF 113552792160

Příbalový leták konkrétního používaného tekutého kontrolního materiálu společnosti Biorad,LiquichekTM

 

 

OSN-SKódy, názvy, definice a terminologieOSN-E

sérum/plazma

C-reaktivní protein, CRP  

Reagenční souprava: ROCHE CRP4kat. č.: 007876033190

Název v lokálním číselníku LIS: CRP

Klíč v lokálním číselníku LIS: CRP

Číslo metody v lokálním číselníku LIS: 85

Kód metody v analyzátoru: 256

Název metody v analyzátoru: CRP

Seznam zdravotních výkonů VZP: 91153 CRP sérum, plazma

 

OSN-SPrincip a metoda postupuOSN-E

C-reaktivní protein obsažený ve vzorku reaguje se svou specifickou protilátkou, která je ukotvena na latexových částicích v reagenciích soupravy. Dochází k aglutinaci CRP ze vzorku a protilátky z reagenční soupravy a následně k nárůstu turbidity (zákalu) vznikajících imunokomplexů, tento nárůst se měří fotometricky při 570/ 800 nm.

 

OSN-SMísto provádění postupuOSN-E

OKBH, úsek biochemický, Nemocnice AGEL Ostrava - Vítkovice a.s., Zalužanského 1192/15, 703 84 Ostrava-Vítkovice

 

OSN-SBezpečnostní aspekty a podmínky prostředíOSN-E

Je nutné dodržovat obecné zásady bezpečnosti práce podle směrnice VN BOZP č.8.02, ale i zásady práce s biologickým materiálem, který může být zdrojem přenosu některých infekcí. Zejména je třeba zachovávat pravidla osobní hygieny, používat osobní ochranné pracovní prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci nejíst, nepít a nekouřit. Po práci a před jídlem omýt pokožku především rukou teplou vodou a mýdlem a ošetřit vhodným reparačním krémem. Při zasažení očí vymývat velkým množstvím vlažné vody nejméně 15 minut. Při zasažení oděvu a kůže odložit veškeré kontaminované oblečení. Okamžitě kůži omýt velkým množstvím, pokud možno vlažné vody, popř. mýdlem nebo jiným vhodným mycím prostředkem. Při náhodném požití vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru vody a vyhledat lékařskou pomoc.

 

 

OSN-SFáze před vyšetřením (příprava pacienta)OSN-E

CRP patří mezi bílkoviny akutní fáze produkované játry v odpovědi na uvolnění zánětlivých cytokinů např. Interleukinu-6.

Název bílkoviny je odvozen od jeho schopnosti precipitovat C-polysacharid pneumokoků.  Jeho koncentrace se významně zvyšuje v reakci na akutní nebo chronický zánět, který může provázet bakteriální infekci, autoimunitní nemoc nebo nemoc s tvorbou imunitních komplexů, tkáňovou nekrózu a malignity, trauma, operační zátěž nebo myokardiální infarkt. Nárůst se děje během 24 - 48 hodin a jeho hladina může zvýšit až 2000x. V mnoha případech změna v sérové hladině CRP předchází klinickým příznakům. Stupeň zvýšení hodnot CRP odráží při akutním zánětu masu zánětlivé tkáně nebo aktivitu infekce a dobře koreluje s průběhem onemocnění. Nárůst však není pro daná onemocnění specifický, proto jej nelze interpretovat bez znalosti kompletní anamnézy a bez srovnání s hodnotami naměřenými za fyziologických podmínek. Trvale zvýšená hladina CRP svědčí obecně o neúčinnosti zvolené terapie. Normální hladiny CRP nevylučují přítomnost minoritních forem akutních či lokalizovaných zánětů nebo chronických onemocnění např. SLE či ulcerózní kolitidy.

CRP je bílkovina s elektroforetickou pohyblivosti beta-globulinů o molekulové hmotnosti 100 000 -115 000, která se skládá z pěti identických podjednotek tvořících cyklický pentamer. Část molekuly vykazuje homologii s konstantní částí těžkého řetězce IgG a uplatňuje se patrně v imunitní obraně organismu. CRP má schopnost aktivovat komplementový systém, váže se na různé ligandy, například na polysacharidový obal pneumokoků C, dále na cholinové fosfatidy a některé kationty. Aktivace komplementu působením CRP se děje nejen klasickou, ale též alternativní cestou. Kromě toho CRP může působit i na trombocyty účinkem na metabolismus prostaglandinů. Takto může CRP regulovat akutní zánětlivé procesy. Bylo prokázáno, že může bránit stimulaci T-lymfocytů a uvolňování lymfokinů. Dále může ovlivňovat fagocytózu působením na granulocyty a monocyty.

 

OSN-SOdběr primárního vzorku (druh, nádobka, transport)OSN-E

Odběr

Sérum: Odběr se provádí standardním způsobem ze žilní krve, do plastové zkumavky

s aktivátorem srážení nebo se separačním gelem za použití uzavřeného odběrového systému. Speciální příprava pacienta ani dieta není nutná, pro obvyklé vyšetřování je vhodný odběr ráno.

Plazma: Li-heparin, K2-, K3-EDTA

Transport

Transport materiálu na oddělení OKBH VTN je popsán ve směrnici S-OKBH-006 Směrnice pro transport a příjem vzorků.

Skladování

Sérum/plazma je na OKBH po provedení analýzy skladováno v lednici při +2 až + 8°C po dobu 2 dnů pro potřeby dodatečně požadovaných vyšetření. Doba dodatečně požadovaných vyšetření se řídí podle seznamu uvedeném v  LP C-03 Ústní požadavky na vyšetření.

V případě delšího skladování pro potřebu analýzy, je sérum/plazma skladováno zamraženo při teplotě -20°C po dobu maximálně 1 měsíce.

Interference sérum/plazma

 

Stanovení ovlivňuje hemolýza je-li koncentrace hemoglobinu > 622 µmol/l

Stanovení ovlivňuje koncentrace konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu > 1026 µmol/l

Stanovení ovlivňuje lipémie je-li index L > 1000

 

Stabilita měřené veličiny v séru a Li-heparizované plazmě dle příbalového letáku

+15 až +25°C: 2 týdny, +2 až +8°C: 3 týdny, 1rok při -20 0C

Stabilita měřené veličiny v K2   a K3 EDTA plazmě dle příbalového letáku

+15 až +25°C: 1 den, +2 až +8°C: 3 týdny, 1rok při -20 0C

 

 

OSN-SOmezeníOSN-E

Laboratoř může odmítnout přijetí materiálu a neprovést požadované vyšetření z obecných důvodů uvedených v Laboratorní příručce v kapitole kritéria pro přijetí nebo odmítnutí primárních vzorků.

 

OSN-SManipulace se vzorkyOSN-E

Manipulace se vzorky probíhá podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem uvedených v Laboratorní příručce a Příručce kvality.

Primární zkumavka s biologickým materiálem je centrifugována 10 minut při rychlosti 2000 g (rcf)

Resp. 3333 ot/min. Po centrifugaci je odeslána k analýze. Vzorky obsahující sraženinu musí být před analýzou opět centrifugovány. 

 

OSN-SPřístroje a pomůckyOSN-E

Centrifuga

Biochemický analyzátor Cobas 6000, modul c501

 

OSN-SReagencieOSN-E

Souprava Roche Cobas c 501 ROCHE CRP4kat. č.: 07876033190

Výrobce soupravy: Roche diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim

Dodavatel soupravy: Roche s.r.o., Diagnostics division, Na Valentince 336/4, 150 00 Praha - 5

Diluent NACL 9%

 

Složení reagencií v soupravě:

reagencie

obsah reagencie

R1

TRIS oufr s hovězím sérovým albuminem,konzervans

 

R2

Latexové částice potažené anti-CRP (myší) v glycinovém pufru,imunoglobuliny,konzervans

 

Skladování: Reagencie jsou skladovány v lednici ve vzpřímené poloze při teplotě +2 až + 8 °C

Stabilita: Neotevřené reagencie jsou stabilní do označené doby exspirace při +2 až + 8 °C.

Stabilita v analyzátoru: 12 týdnů, NaCL -12 týdnů

Manipulace s reagenciemi: Reagencie je připravena k použití a do analyzátoru se vkládá bez úprav.

Ověřování kvality: Provádí se denně pomocí interní kontroly kvality.

 

OSN-SSpotřební materiálOSN-E

Odběrové nádobky

Špičky k automatickým pipetám

 

OSN-SPříprava k činnostiOSN-E

Přístroj se uvede do stavu STAND BY dle návodu v manuálu analyzátoru  PI-OKBH-18 Manuál analyzátoru Cobas c501/6000.

    

OSN-SPracovní postupOSN-E

Množství pipetovaného vzorku séra, plazmy: 2,0 µl

 

Záznamy o pravidelné údržbě analyzátoru jsou uvedeny v provozním deníku.

 

Denně, před vlastním měřením vzorků, se provede kontrola kvality v kontrolních sérových materiálech na hladině 1 a 2.  S-OKBH-004 Směrnice pro IKK

 

V případě, že výsledky kontrolních materiálů neodpovídají nastavenému tolerančnímu rozmezí, musí se nalézt a odstranit závada, eventuálně provést nová kalibrace a následně zopakovat kontrola kvality.

Vyhovuje-li naměřený výsledek očekávané hodnotě kontrolního materiálu, je možné přistoupit k vkládání vzorků do přístroje. Vzorky označené čárovým kódem jsou kontrolovány na přítomnost hemolýzy, chylozity a jsou vkládány do šedých stojánků na posuvný pás Roche cobas 6000.Pokud je biologického materiálu málo přepipetuje se do hitachi kepu, který se umístí do jiné plastové zkumavky označené čárovým kódem.

Pokud je analyzátor ve stavu STAND BY, stiskneme ikonu START v základní obrazovce řídícího počítače pro zahájení analýzy, která dále probíhá automaticky.

Požadavky na analýzy se do analyzátoru přenášejí počítačovou sítí prostřednictvím laboratorního informačního systému (LIS) nebo se mohou zadávat ručně pomocí klávesnice řídícího počítače analyzátoru.

Výsledky se z analyzátoru automaticky přenáší zpět do LIS ke kontrole a schválení, které provádí pověřený pracovník.

Obsluha analyzátoru se řídí vnitřními bezpečnostními a hygienickými předpisy laboratoře a pracovní instrukcí 

PI-OKBH-18 Manuál analyzátoru Cobas c501/6000.

 

OSN-SStručný popis postupuOSN-E

1. Vloží se reagenční souprava.

2. V případě potřeby se provede kalibrace.

3. Vloží se analyzované vzorky do šedého stojánku, který se umístí na posuvný pás

4. Pokud je analyzátor ve stavu STANDBY, stiskne se ikona START a tím se zahájí analýza, která dále probíhá automaticky.

5. Výsledky testů jsou průběžně z přístroje odesílány do systému LIS, kde jsou kontrolovány.

 

 OSN-SKalibrace a návaznostOSN-E

Přesný popis kalibrace metody je uveden v manuálu  PI-OKBH-18 Manuál analyzátoru Cobas c501/6000

 

Ke kalibraci CRP pro sérum (plazmu) se používá Roche calibrator f.a.s. Proteins, který je připraven z lidského séra s chemickými přídavky.

 

Návaznost:

Metoda je standardizována podle certifikovaného referenčního materiálu v lidském séru IRMM ERM-DA474/IFC

 

Příprava kalibrátoru:

Kalibrátor je dodáván v kapalném stavu a je připraven k okamžitému použití.

Stabilita kalibrátoru:

Neotevřený kalibrátor je stabilní do doby exspirace vyznačené na štítku lahvičky při skladování v lednici +2 až + 8 °C.

Otevřený kalibrátor je stabilní 4 týdny   uložený v lednici při +2 až +8 °C při zabránění mikrobiální kontaminace.

 

Vlastní kalibrace:

Ke kalibraci se používá výše uvedený kalibrátor. Typ reakce Non-linear

Kalibrace se provádí pomocí sérové matrice v odpovídajícím černém kalibračním stojánku, nulový bod je deionizovaná voda (tzv. reagenční blank).

Bezprostředně po provedení kalibrace se musí provést kontrola kvality.

 

Frekvence kalibrace: při změně šarže reagencie a dále podle potřeby v souvislosti s vyhodnocováním kontroly kvality a stability kalibrace reagencie v přístroji.

 

Způsob dokumentace kalibračních dat:

Provedené kalibrace se uchovávají v paměti analyzátoru. Výsledky každé kalibrace jsou vytištěny a založeny do dokumentace kalibrací Roche Cobas c 501.

 

OSN-SCharakteristika spolehlivostiOSN-E

Charakteristika spolehlivosti z příbalového letáku

Rozsah měření v séru, plazmě:

Při stanovení CRP v séru, plazmě je oblast linearity 0,6 – 350,0 mg/l 

Opakovatelnost (přesnost v sérii): viz.přibalový leták

               

Mezilehlá preciznost (mezi sériemi): viz.přibalový leták

 

Mez detekce: 0,3 mg/l

 

Mez stanovitelnosti: 0,6 mg/l

 

Korelace s jinou metodou: Hodnoty CRP získané na analyzátoru Roche/cobas c501 byly porovnány s hodnotami stanovenými použitím stanovení CRP Gen.3 na analyzátoru Roche/cobas C 501

 

Typ vzorku

Počet vzorků

Rovnice

Passing/Bablok

Korelační koeficient

Rozmezí vzorku

Sérum,

plazmy

120

Y=0,988x + 0,222

0,988

0,670– 347 mg/l

 

Aktuální charakteristiky spolehlivosti:

Aktuální charakteristiky spolehlivosti jsou uvedeny v platném verifikačním protokolu CRP pro analyzátor Roche cobas c 501.

 

OSN-SDokumentace, zpracování dat a vydávání výsledkůOSN-E

Hodnoty výsledků stanovení CRP v séru, plazmě se udávají na jedno desetinné místo, v mg/l.

Poznámka: Přepočet starších jednotek používaných dříve pro CRP: mg/dl x 10 = mg/l.

 

Výsledky stanovení jsou uloženy v softwaru analyzátoru, další pracovní den jsou ráno před začátkem provozu archivovány na externí disk. Všechny výsledky se také archivují v elektronické formě v laboratorním informačním systému a denně je zálohována hlavní kniha.

 

 

Lékařům na odděleních a ambulancích Nemocnice Agel Ostrava Vítkovice a.s. jsou výsledky vyšetření k dispozici elektronicky v NIS a v případě potřeby v tištěné podobě u příjmového okna v laboratoři.

 

Spolupracujícím lékařům jsou výsledky zasílány průběžně elektronicky a následující den doručovány v tištěné podobě se svozem biologického materiálu.

 

Výsledkový list obsahuje:

identifikaci laboratoře, která výsledek vydala

odkaz na akreditaci laboratoře

datum a čas vydání nálezu

jednoznačnou identifikaci pacienta

zdravotní pojišťovnu pacienta

identifikaci požadujícího subjektu (lokalizaci pacienta, je-li to vhodné)

identifikaci požadujícího lékaře (resp. oddělení)

diagnózu pacienta

druh biologického materiálu (např. sérum, plazma, moč, krev u vyšetření krevního obrazu)

jasně srozumitelnou identifikaci vyšetření

datum a čas přijetí vzorku laboratoří

datum a čas odběru vzorku,

výsledek vyšetření s odpovídajícími jednotkami (nejčastěji SI jednotky)

označení akreditované metody

referenční meze

interpretaci výsledků, je-li to nutné

jiné poznámky (např. kvalita nebo dostatečnost primárního vzorku, pokud tato může nežádoucím způsobem ovlivnit výsledek požadovaného vyšetření)

identifikaci osob, které výsledkovou zprávu kontrolovaly a schválily

zkratky identifikující žádanku

př. 20.BR-0777

·         20: den v měsíci, BR: biochemie rutina, 0777: číslo vzorku

·         př. 20.HH-0777

·         20: den v měsíci, HH: hematologie, 0777: číslo vzorku

 

OSN-SReferenční a varovná rozmezíOSN-E

Zdroj: příbalový leták

 

Sérum, plazma:  do 5,0 mg/l

Postup pro nahlášení kritické hodnoty výsledku laboratorního vyšetření je uveden ve směrnici S-OKBH-012 Směrnice pro vydávání výsledků.

 

OSN-SInterpretace výsledků, konzultační činnosti a hlášení

 

Příčiny zvýšených hodnot

· bakteriální infekce

· infarkt myokardu

· zánětlivá onemocnění (revmatiodní artritis, vaskulitida,

   Crohnova choroba, ankylózující spondylitida

· neoplasmata

 

Patologické změny: za patologických stavů se koncentrace CRP v krvi může zvýšit až 2000x.

CRP je dominující protein akutní fáze. Nejvyšších hodnot dosahuje u bakteriálních infekcí,

u nádorových onemocnění je obvykle jeho navýšení mnohem nižší. Vzestup CRP po zahájení reakce akutní fáze při infekci, chirurgickém zákroku, infarktu myokardu je velmi rychlý, maxima dosahuje za 24 - 48 hodin. Normalizace nastává během 4 dnů. U novorozeneckých infekcí s těžším průběhem (septikémie, meningitida, peritonitida) je CRP vždy zvýšen. Na rozdíl od infekcí způsobených bakteriemi nebývá virová infekce provázena zvýšením CRP.

 

OSN-SŘízení kvalityOSN-E

 

Ke kontrole a řízení kvality pro stanovení CRP v séru, plazmě se používá tekutý kontrolní materiál firmy  firmy Biorad LiquicheckTM Imunology Control ve dvou hladinách se sérovou  matricí pro dvě hodnoty koncentrací  CRP měřené na biochemickém analyzátoru ROCHE Cobas 6000/c501.

 

Příprava:

Tekutý kontrolní materiál se uchovává zamražený při teplotě -20°C.

Před použitím se nechá kontrola za laboratorní teploty a bez přístupu přímého světla pozvolna rozpustit za občasného promíchání kroužením lahvičky pro zajištění homogenity materiálu. Netřepe se, aby se zabránilo tvorby pěny. Rozmražený materiál se uchovává v lednici při +2 až +8 °C a před každým opakovaným použitím se opatrně promíchá pro zajištění homogenity vzorku kontroly.

 

Stabilita: Tekutá kontrolní séra se uchovávají zamražená při teplotě -20°C, v tom případě jsou stabilní až do doby exspirace vyznačené na obale. Používaná rozmražená lahvička s kontrolním sérem se uchovává v lednici při +2 až +8 °C do spotřebování, nejdéle 1 týden.

 

 

 

Použití: Měření kontrolních materiálů se provádí denně, po každé kalibraci, při výměně soupravy stejné šarže. Výsledky jsou kontrolovány pověřeným pracovníkem. Postupuje se podle směrnice S-OKBH-004 Směrnice pro IKK

 

Dokumentace:

Výsledky interní kontroly kvality jsou uchovávány v softwaru přístroje, zálohovány na externí disk a elektronicky přenášeny do programu LIS a Unity Real Time. Kontrola kvality je v LIS rovněž validována vedoucím úseku. Dlouhodobě jsou výsledky kontrol sledovány v programu UnityRealTime firmy Biorad a 1x měsíčně provedeno celkové měsíční zhodnocení výsledků kontrol vedoucím úseku. 

 

Součástí kontroly a řízení kvality je pravidelná účast na mezilaboratorních kontrolách kvality organizovaných v rámci České republiky společností SEKK. Laboratoř se jí účastní nejméně 2x ročně.

 

 

OSN-SPoznámkyOSN-E

nevyplněno

 

OSN-SJiné související informaceOSN-E

nevyplněno

 

OSN-SLiteraturaOSN-E

 

OSN-SAppendixyOSN-E

nevyplněno

 

OSN-SAutorské poznámky

nOSN-Eevyplněno

 

OSN-SRecenze, schváleníOSN-E

Autor: Mgr. Pavlína Babičová