Abstrakt
Kvantitativní stanovení GGT v séru, plazmě pomocí enzymatického
kinetického testu soupravou ROCHE GGT-2 na biochemickém analyzátoru Roche Cobas
6000/c501.
Seznam
souvisejících dokumentů a textů
Laboratorní příručka
Příručka kvality
Provozní řád
S-OKBH-005 Směrnice
EHK
S-OKBH-004 Směrnice pro IKK
S-OKBH-019 Verifikace postupů měření
PI-OKBH-18 Manuál
analyzátoru Cobas c501/6000
PI-OKBH-04 Práce s
LIPOCLEAR
Příbalový leták Roche Cobas GGT-2 pro kvantitativní stanovení GGT kat.č.
REF03002721122
Příbalový leták pro Systémový kalibrátor Roche C.f.a.s., katalogové
číslo 10759350190
Příbalový leták konkrétního
používaného tekutého kontrolního materiálu společnosti Biorad,LiquichekTM
Kódy
a názvy v různých klasifikačních systémech
sérum/plazma
GGT, dříve GMT,γ-glutamyltransferáza,
gama-glutamyltransferáza, glutamyltranspeptidáza
Reagenční souprava: Roche Cobas GGT-2 kat.č.
REF03002721122
Název v lokálním číselníku LIS: GGT
Klíč v
lokálním číselníku LIS: GGT
Číslo metody v lokálním číselníku
LIS: 31
Kód metody
v analyzátoru: 220
Název metody
v analyzátoru: GGT
Seznam zdravotních
výkonů VZP: 81435 GGT
81153 GGT
STATIM
Princip
Stanovení je založeno na doporučeních IFCC.
GT katalyzuje přenos γ-glutamylové
skupiny ze substrátu L-γ-glutamyl-3-karboxy-4-nitroanilidu na glycylglycin
za uvolnění 5-amino-2-nitrobenzoátu, jehož přírůstek je přímo úměrný aktivitě
GGT ve vzorku.
Stanovuje se fotometricky měřením nárůstu
absorbance.
L-γ-glutamyl-3-karboxy-4-nitroanilid
+ glycylglycin GGT ve vzorku L-γ-glutamylglycylglycin + 5-amino-2-
nitrobenzoát
Místo
provádění postupu
OKBH, úsek biochemický, Nemocnice
AGEL Ostrava - Vítkovice a.s., Zalužanského 1192/15, 703 84 Ostrava-Vítkovice
Bezpečnostní
aspekty
Je nutné dodržovat obecné
zásady bezpečnosti práce podle směrnice VN BOZP č.8.02, ale i zásady práce s
biologickým materiálem, který může být zdrojem přenosu některých infekcí.
Zejména je třeba zachovávat pravidla osobní hygieny, používat osobní ochranné
pracovní prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci nejíst, nepít
a nekouřit. Po práci a před jídlem omýt pokožku především rukou teplou
vodou a mýdlem a ošetřit vhodným reparačním krémem. Při zasažení očí
vymývat velkým množstvím vlažné vody nejméně 15 minut. Při zasažení oděvu a
kůže odložit veškeré kontaminované oblečení. Okamžitě kůži omýt velkým
množstvím, pokud možno vlažné vody, popř. mýdlem nebo jiným vhodným mycím
prostředkem. Po umytí ošetřit vhodným reparačním krémem. Při náhodném
požití vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru vody a vyhledat lékařskou
pomoc.
Fáze
před vyšetřením
Stanovení aktivity GGT v séru patří
mezi rutinní metody klinické biochemie. Indikací pro vyšetření je celá řada:
hepatobiliární onemocnění a sledování jejich průběhu, alkoholismus, infekční
mononukleóza a jiné.
GGT je membránově vázaný enzym, glykoprotein
složený z lehkého (189 aminokyselin) a těžkého (351 aminokyselin)
polypeptidového řetězce. Vyskytuje se ve všech tkáních, zejména
v membránách buněk s vysokou sekreční nebo absorpční schopností (v
játrech, ledvinách, pankreatu, tenkém střevě a v prostatě).
GGT se podílí na transportu aminokyselin
přes buněčnou membránu. Katalyzuje reakci, při níž se z peptidu
obsahujícího γ-glutamylový zbytek (glutathion) odštěpí γ-glutamyl,
který je přenesen na aminokyselinu za vzniku dipeptidu. Tento dipeptid je
uvolněn z vazby na enzym GGT a aminokyselina se tak dostává do cytoplazmy.
Odběr primárního
vzorku a transport
Odběr
Sérum: Odběr se provádí standardním
způsobem ze žilní krve, do plastové zkumavky
s aktivátorem
srážení nebo se separačním gelem za použití uzavřeného odběrového systému.
Speciální příprava pacienta ani dieta není nutná, pro obvyklé vyšetřování je
vhodný odběr ráno.
Plazma: Li-heparin, EDTA
Při odběru primárního vzorku se postupuje podle pracovní instrukce PI-OKBH-19 Odběr vzorku.
Transport
Transport materiálu na oddělení OKBH VTN je
popsán ve směrnici S-OKBH-006 Směrnice pro transport a příjem
vzorků.
Skladování
Sérum/plazma je na OKBH po provedení analýzy skladováno
v lednici při +2 až +
V případě
delšího skladování pro potřebu analýzy, je sérum/plazma skladováno
zamraženo při teplotě
Interference
sérum/plazma.
Stanovení ovlivňuje hemolýza je-li
koncentrace hemoglobinu > 124 µmol/l
Stanovení ovlivňuje koncentrace
konjugovaného bilirubinu je- li >855 µmol/l a nekonjugovaného bilirubinu,
je- li > 342 µmol/l
Stanovení ovlivňuje lipémie je-li index L
> 1500
Stabilita měřené veličiny
v séru/plazmě dle příbalového letáku
+15 až +25°C: 7 dní,
+2
až +8°C: 7 dní
Omezení
Laboratoř může odmítnout přijetí materiálu a neprovést požadované
vyšetření z obecných důvodů uvedených v Laboratorní příručce
v kapitole kritéria pro přijetí nebo odmítnutí primárních vzorků.
Manipulace
se vzorky
Manipulace se vzorky probíhá podle běžných zásad práce s biologickým
infekčním materiálem uvedených v Laboratorní příručce a Příručce kvality.
Primární zkumavka s biologickým materiálem je centrifugována 10
minut při rychlosti
Přístroje
a pomůcky
Centrifuga
Biochemický analyzátor Roche Cobas 6000 c501
Reagencie
Souprava GGT-2, pro analyzátor
Cobas 6000, modul c501, kat. č.REF 03002721122, 400 testů
Diluent NaCL 9%
Výrobce soupravy: Roche diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse
116, D-68305 Mannheim
Dodavatel soupravy:
Roche s.r.o., Diagnostics division, Na Valentince 336/4, 150 00 Praha - 5
|
reagencie |
obsah reagencie |
|
R1 |
TRIS pufr: 492 mmol/l pH 8,25 Glycylglycin: 492 mmol/l konzervans |
|
R2 |
Pyridoxalfosfát: 730 mmol/l L-γ-glutamyl-3-karboxy-4-nitroanilid: 22,5 mmol/l Acetát: 10 mmol/l konzervans stabilizátor |
Skladování: Reagencie jsou skladovány v lednici při
teplotě +2 až +
Stabilita: Neotevřené reagencie jsou stabilní do
označené doby exspirace při +2 až +
Stabilita v analyzátoru: 12 týdnů, Diluent NaCl 9 % 12 týdnů
Manipulace s reagenciemi: reagencie jsou připraveny k použití do
analyzátoru bez úprav.
Ověřování kvality: Provádí se denně pomocí interní kontroly
kvality.
Spotřební materiál
Odběrové nádobky
Špičky k automatickým pipetám
Příprava k činnosti
Přístroj se uvede do stavu STANDBY dle návodu v manuálu analyzátoru
PI-OKBH-18
Manuál analyzátoru Cobas c501/6000.
Silně chylózní vzorky běžně nezpracováváme. Jestliže lékař stanovení GGT
požaduje, postupujeme podle návodu pro práci s LIPOCLEAR PI-OKBH-04 Práce s LIPOCLEAR.
Pracovní
postup
Množství pipetovaného vzorku séra, plazmy: 3,0
µl
Přesný popis analýzy včetně
ovládání přístroje, je uveden v manuálu analyzátoru
PI-OKBH-18 Manuál analyzátoru Cobas c501/6000.
Denně, před vlastním měřením
vzorků, se provede kontrola kvality v kontrolních sérových materiálech na
dvou hladinách S-OKBH-004
Směrnice pro IKK.
V případě, že výsledky
kontrolních materiálů neodpovídají nastavenému tolerančnímu rozmezí, musí se
nalézt a odstranit závada, eventuálně provést nová kalibrace a následně
zopakovat kontrola kvality.
Vyhovuje-li naměřený výsledek
očekávané hodnotě kontrolního materiálu, je možné přistoupit k vkládání
vzorků do přístroje. Vzorky označené čárovým kódem jsou kontrolovány na
přítomnost hemolýzy, chylozity a jsou vkládány do šedých stojánků na posuvný
pás Roche cobas c501.Pokud je biologického materiálu málo přepipetuje se do
Hitachi kepu, který se umístí do jiné plastové zkumavky označené čárovým kódem.
Pokud je analyzátor ve stavu
STAND BY, stiskneme ikonu START v základní obrazovce řídícího počítače pro
zahájení analýzy, která dále probíhá automaticky.
Požadavky na analýzy se do
analyzátoru přenášejí počítačovou sítí prostřednictvím laboratorního
informačního systému (LIS) nebo se mohou zadávat ručně pomocí klávesnice
řídícího počítače analyzátoru.
Výsledky se z analyzátoru
automaticky přenáší zpět do LIS ke kontrole a schválení, které provádí pověřený
pracovník.
Obsluha analyzátoru se řídí
vnitřními bezpečnostními a hygienickými předpisy laboratoře a pracovní
instrukcí
PI-OKBH-18
Manuál analyzátoru Cobas c501/6000.
Stručný
popis postupu
1. Vloží se reagenční souprava.
2. V případě potřeby se provede kalibrace.
3. Vloží se analyzované vzorky do šedého stojánku, který se umístí na
posuvný pás
4. Pokud je analyzátor ve stavu STANDBY, stiskne se ikona START a tím se
zahájí analýza, která dále probíhá automaticky.
5. Výsledky testů jsou průběžně z přístroje odesílány do systému
LIS, kde jsou kontrolovány.
Kalibrace a
návaznost
Přesný popis kalibrace metody je
uveden v manuálu analyzátoru PI-OKBH-18 Manuál analyzátoru Cobas c501/6000
Ke kalibraci metody pro sérum
(plazmu) se používá kalibrátor C.f.a.s., katalogové číslo 10759350190, který je
připraven z lidských sér s chemickými aditivy a příslušnými enzymy
lidského, zvířecího a rostlinného původu s deklarovanou hodnotou pro GGT.
Návaznost:
Metoda je standardizována podle originální formulace IFCC a dle metody
GGT publikované Persiánem a van der Slikem (1976).
Příprava kalibrátoru:
Kalibrátor je dodáván v
lyofilizovaném stavu.
Doporučený postup rekonstituování
lyofilizovaného kalibrátoru:
1.Opatrně otevřít lahvičku a
vyjmout gumovou vložku. Přitom věnovat maximální pozornost zabránění ztrátám lyofilizovaného materiálu
zachyceného na gumové vložce.
2.Přidat do lahvičky přesně 3,0
ml vody Aqua pro injectione Braun.
3.Uzavřít gumovou vložkou a po 30
minutách opatrně promíchat (netřepat!) až do kompletního rozpuštění obsahu.
Stabilita:Lyofilizovaný kalibrátor je stabilní do doby exspirace
vyznačené na obalu při skladování v lednici +2 až + 8°C. Otevřený a
rekonstituovaný materiál je stabilní 2 dny uložený v lednici při +2 až +
Vlastní kalibrace:
Kalibrace je 2-bodová, typ RATE a
provádí se pomocí sérové matrice v odpovídajícím černém kalibračním
stojánku, nulový bod je deionizovaná voda tzv. reagenční blank.
Bezprostředně po provedení kalibrace se musí provést kontrola kvality.
Frekvence kalibrace:
Provádí se při změně šarže
reagencie a dále podle potřeby v souvislosti s vyhodnocováním
kontroly kvality a stability kalibrace reagencie v přístroji.
Způsob dokumentace kalibračních dat:
Provedené
kalibrace se uchovávají v paměti analyzátoru. Výsledky každé kalibrace jsou
vytištěny a založeny do dokumentace kalibrací Roche cobas c501.
Charakteristika
spolehlivosti
Charakteristika spolehlivosti z příbalového letáku
Rozsah měření v séru, plazmě:
Při stanovení
GGT v séru, plazmě je oblast linearity 0,05– 20,0 mkat/l.
Opakovatelnost (přesnost
v sérii):
Sérum,
plazma:
|
Opakovatelnost
(n=21) |
Průměr [mkat/l] |
SD [mkat/l] |
CV [%] |
|
Precinorm U |
0,76 |
0,01 |
0,9 |
|
Precipath U |
3,77 |
0,03 |
0,7 |
|
Lidské sérum
1 |
0,57 |
0,01 |
0,9 |
|
Lidské sérum
2 |
2,51 |
0,02 |
0,8 |
Mezilehlá preciznost (mezi sériemi):
|
Mezilehlá preciznost |
Průměr [mkat/l] |
SD [mkat/l ] |
CV [%] |
|
Precinorm U |
0,736 |
0,013 |
1,8 |
|
Precipath U |
3,69 |
0,07 |
1,7 |
|
Lidské sérum
3 |
0,782 |
0,025 |
3,2 |
|
Lidské sérum
4 |
4,28 |
0,15 |
3,7 |
Mez detekce: 0,05 µkat/l
Mez stanovitelnosti: výrobce neuvádí, odvozena z meze detekce
0,15µkat/l
Korelace s jinou metodou: Hodnoty GGT získané na analyzátoru Roche/cobas c501 byly porovnány s
hodnotami stanovenými použitím odpovídající reagencie na analyzátoru
Roche/Hitachi 917
|
Typ vzorku |
Počet vzorků |
Rovnice Passing/Bablok |
Korelační koeficient |
Rozmezí vzorku |
|
sérum |
177 |
Y=0,989 x- 0,007 |
0,979 |
0,075 – 18,4 µkat/l |
Aktuální charakteristiky spolehlivosti:
Aktuální charakteristiky spolehlivosti jsou
uvedeny v platném verifikačním protokolu GGT v séru, plazmě pro
analyzátor Roche
Cobas 6000/ c 501.
Dokumentace, zpracování dat a vydávání
výsledků
Hodnoty výsledků stanovení GGT v séru, plazmě se udávají na dvě
desetinná místa v μkat/l.
Poznámka: Přepočet
jednotek používaných pro GGT: U/l x 0,0167 = μkat/l.
Výsledky stanovení jsou uloženy v softwaru analyzátoru, další pracovní
den jsou ráno před začátkem provozu archivovány na externí disk. Všechny
výsledky se také archivují v elektronické formě v laboratorním informačním
systému a denně je zálohována hlavní kniha
Lékařům na odděleních a ambulancích Nemocnice
Agel Ostrava Vítkovice a.s. jsou výsledky vyšetření k dispozici
elektronicky v NIS a v případě potřeby v tištěné podobě u
příjmového okna v laboratoři.
Spolupracujícím lékařům jsou výsledky zasílány
průběžně elektronicky a následující den doručovány v tištěné podobě
se svozem biologického materiálu.
Výsledkový list obsahuje:
·
identifikaci laboratoře, která výsledek vydala
·
odkaz
na akreditaci laboratoře
·
datum a čas vydání nálezu
·
jednoznačnou identifikaci pacienta
·
zdravotní
pojišťovnu pacienta
·
identifikaci
požadujícího subjektu (lokalizaci pacienta, je-li to vhodné)
·
identifikaci
požadujícího lékaře (resp. oddělení)
·
diagnózu
pacienta
·
druh
biologického materiálu (např. sérum, plazma, moč, krev u vyšetření krevního
obrazu)
·
jasně
srozumitelnou identifikaci vyšetření
·
datum a
čas přijetí vzorku laboratoří
·
datum a
čas odběru vzorku,
·
výsledek
vyšetření s odpovídajícími jednotkami (nejčastěji SI jednotky)
·
označení
akreditované metody
·
referenční
meze
·
interpretaci výsledků, je-li to nutné
·
jiné poznámky
(např. kvalita nebo dostatečnost primárního vzorku, pokud tato může nežádoucím
způsobem ovlivnit výsledek požadovaného vyšetření)
·
identifikaci
osob, které výsledkovou zprávu kontrolovaly a schválily
·
zkratky
identifikující žádanku
př. 20.BR-0777
·
20: den
v měsíci, BR: biochemie rutina, 0777: číslo vzorku
·
př.
20.HH-0777
·
20: den
v měsíci, HH: hematologie, 0777: číslo vzorku
Referenční, varovné nebo
kritické hodnoty
Zdroj: dle příbalového letáku:
Sérum, plazma muži: 0,17 – 1,19 mkat/l
ženy: 0,1 - 0,7 mkat/l
Interpretace
výsledků, konzultační činnosti a hlášení
Zvýšení aktivity GGT může být způsobeno:
-
zvýšenou
syntézou enzymu
-
poškozením
buněčné membrány toxickými látkami, ischémií nebo přímou destrukcí
-
oddělením
enzymu od membrány působením detergentního účinku žlučových kyselin
-
přestupem
žluče do krve
Zvýšené hodnoty aktivity GGT v séru se nachází u:
-
akutního
toxického poškození jater
-
akutní
virové hepatitidy
-
alkoholismu
a při aplikaci různých léků (sedativa, antiepileptika, fenytoin, fenobarbital,
aj.)
-
alkoholické
cirózy
-
chronické
aktivní hepatitidy
-
jaterní
cirhózy
-
jaterní
metastázy
-
akutní i
chronické pankreatitidy
-
infekční
mononukleózy
-
infarktu
myokardu
-
obstrukčního
hepatálního a posthepatálního ikteru
-
steatózy
jater
-
nemoci
pankreatu
-
hyperthyroidismu
Snížené hodnoty aktivity GGT v séru se nachází u:
-
hypothyroidismu
-
geneticky
podmíněné nedostatečnosti GGT
Postup pro nahlášení kritické hodnoty
výsledku laboratorního vyšetření je uveden ve směrnici
S-OKBH-012 Směrnice
pro vydávání výsledků.
Řízení kvality
Ke
kontrole a řízení kvality pro stanovení GGT v séru, plazmě se používá
tekutý kontrolní materiál firmy Biorad Liquid Assayed Multiqual se sérovou
matricí ve třech rozmezích koncentrace pro GGT měřený na biochemickém
analyzátoru ROCHE Cobas 6000/c501.
Příprava:
Tekutá
kontrolní séra se uchovávají zamražená při teplotě
Před
použitím se nechá kontrola za laboratorní teploty a bez přístupu přímého světla
pozvolna rozpustit za občasného promíchání kroužením lahvičky pro
zajištění homogenity materiálu. Netřepe se, aby se zabránilo tvorby pěny.
Z rozmraženého materiálu se připraví alikvoty, které jsou uchovány
v lednici při +2 až +
Stabilita:
Tekutá
kontrolní séra se uchovávají zamražená při teplotě
Použití:
Měření kontrolního materiálu se provádí
denně na dvou hladinách, po každé kalibraci,po doplnění reagencie. Výsledky
jsou kontrolovány pověřeným pracovníkem. Postupuje se podle směrnice S-OKBH-004 Směrnice pro IKK
Dokumentace:
Výsledky interní kontroly kvality jsou uchovávány v softwaru
přístroje, zálohovány na externí disk a elektronicky přenášeny do programu LIS
a Unity Real Time. Kontrola kvality je v LIS rovněž validována vedoucím
úseku. Dlouhodobě jsou výsledky kontrol sledovány v programu
UnityRealTime firmy Biorad a 1x měsíčně provedeno celkové měsíční zhodnocení
výsledků kontrol vedoucím úseku.
Součástí kontroly a řízení kvality je
pravidelná účast na mezilaboratorních kontrolách kvality organizovaných v
rámci České republiky společností SEKK. Laboratoř se jí účastní nejméně 2x
ročně.
nevyplněno
Jiné související informace
nevyplněno
Literatura
Young, D.S.: Effects of
drugs on clinical laboratory tests. AACC, 5th ed. AACC Press, 2000.
Racek, J. et al: Klinická biochemie. Galén, Praha, 2006, ISBN
80-7262-324-9.
Kolektiv autorů:
Preanalytická fáze, Česká společnost klinické biochemie ČLS JEP a SEKK,
Pardubice, 2005, ISBN 80-239-5198-X.
Vnitřní materiály firmy
Roche
Zima, T.:Laboratorní diagnostika, Galén,
Praha 2007
Kopáč, J.:Lékařská laboratorní diagnostika,
Polygraf, Turnov, 2004
Appendixy
nevyplněno
Autorské poznámky
nevyplněno
Recenze, schválení
Autor:
Mgr. Pavlína Babičová