OSN-SAbstraktOSN-E

Stanovení protrombinového času pomocí reagencie Tromborel S. Test monitoruje vnější cestu aktivace přeměny protrombinu na trombin.

 

OSN-SSeznam souvisejících dokumentů

Laboratorní příručka

Příručka kvality

Provozní řád

Skartační řád

S-OKBH-004 Směrnice pro IKK-OKBH

S-OKBH-005 Směrnice EHK

SOPT- Sysmex CS 2500

LP C-11 Informace k transportu vzorku

PI-OKBH-88 Manuál pro analyzátor Sysmex CS 2500

PI-OKBH-32 Provedení kontrol koagulace

PI-OKBH-59 Provedení kalibrace-koagulace

Uživatelský manuál Sysmex

 

OSN-SKódy, názvy, definice a terminologie

Protrombinový test

Reagenční souprava: Thromborel®S reagent, kat.č. OUHP 49

Název v lokálním číselníků LIS: Protrombinový test

Klíč v lokálním číselníků LIS: PT

Číslo metody v lokálním číselníku LIS: 852

Kód metody v analyzátoru Sysmex CS 2500: 04OSN-E

Seznam zdravotních výkonů VZP: 96623

OSN-E 

Rutinní metoda.

PT = tromboplastinový test = protrombinový test = prothrombine time

INR = normalizovaný poměr = international normalized ratio

ISI = index citlivosti tromboplastinu = international senzitivity index

 

OSN-SPrincip

Při inkubaci plazmy s optimálním množstvím tromboplastinu a kalciových iontů je vyvolána koagulace. Měří se čas do vzniku fibrinového koagula.

OSN-E

OSN-SMísto provádění postupuOSN-E

OKBH, úsek koagulace, Vítkovická nemocnice a.s., Zalužanského 1192/15,70384 Ostrava-Vítkovice

 

OSN-SBezpečnostní aspekty

Je nutné dodržovat obecné zásady bezpečnosti práce podle ČSN 01 8003, směrnice VN BOZP č.8.02, ale i zásady práce s biologickým materiálem, který může být zdrojem přenosu některých infekcí. Zejména je třeba zachovávat pravidla osobní hygieny, používat osobní ochranné pracovní prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci nejíst, nepít a nekouřit. Po práci a před jídlem omýt pokožku především rukou teplou vodou a mýdlem a ošetřit vhodným reparačním krémem. Při zasažení očí vymývat velkým množstvím vlažné vody nejméně 15 minut. Při zasažení oděvu a kůže odložit veškeré kontaminované oblečení. Okamžitě kůži omýt velkým množstvím, pokud možno vlažné vody, popř. mýdlem nebo jiným vhodným mycím prostředkem. Po umytí ošetřit vhodným reparačním krémem. Při náhodném požití vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru vody a vyhledat lékařskou pomoc.

  

 OSN-E

OSN-SFáze před vyšetřenímOSN-E

Měření PT pomocí Thromborelu® S slouží jako rychlý a citlivý screeningový test pro stanovení koagulačních poruch v exogenním systému (faktory II, V, VII, X).

 

Odběr primárního vzorku a transport

Odběr

           Plazma: Odběr se provádí standardním způsobem ze žilní krve, do plastové zkumavky s 3,2%

                          citrátem sodným, je nutné dodržet přesný poměr protisrážlivého činidla a krve (1:9) –

 tolerance 10%, pro obvyklé vyšetřování je vhodný odběr ráno po 12 hod. lačnění.

Transport

Transport materiálu na oddělení OKBH VN je popsán v laboratorní příručce LP C-11 Informace k transportu vzorků. Transport materiálu musí být šetrný, rychlý, při teplotě +15°C až+25 °C. Doba transport by neměla být delší než 2 hod.

Skladování

Plazma se po provedení analýzy skladuje při laboratorní teplotě. Plazma nesmí být skladována v lednici! Doba dodatečně požadovaných vyšetření se řídí podle seznamu uvedeném v LP C-03 Ústní požadavky na vyšetření.

Interference

Stanovení ovlivňuje hemolýza a lipémie.

Stabilita analytu v primárním vzorku a v plazmě

+15°C až+ 25°C: 6 hodin, teplota nesmí klesnout pod +15°C,při ochlazení se aktivuje faktor VII a dochází ke zkrácení času PT

 

Omezení

Laboratoř může odmítnout přijetí materiálu a neprovést požadované vyšetření z obecných důvodů uvedených v Laboratorní příručce v kapitole Kritéria pro přijetí nebo odmítnutí primárních vzorků, a pokud je extrémně překročena mimolaboratorní doba odezvy.

 

OSN-SManipulace se vzorky

Manipulace se vzorky probíhá podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem uvedených v Laboratorní příručce a Příručce kvality.

Primární zkumavka s biologickým materiálem je centrifugována 15 minut při rychlosti 2500 g. Pro vitální indikace ultracentrifugace 2 min. při 8000ot./min. Po centrifugaci se ihned provede stanovení. Vzorky obsahující sraženinu, vzorky, u kterých nebyl dodržen poměr krve a činidla a silně chylózní a hemolytické se nezpracovávají.

 

OSN-EPřístroje a pomůcky

Centrifuga Eppendorf 5702, centrifuga Hettich EBA 200S, automatické analyzátory

Sysmex CS 2500-A (výrobní číslo 23894) a Sysmex CS 2500-B (výrobní číslo 25146)

 

Reagencie

Výrobce/dodavatel: Siemens s.r.o, Evropská 873,664 42 Modřice

Obsah balení

Balení 10 x pro 10 ml

Složení

Thromborel®S reagent: lyofilizovaný tromboplastin z humánní placenty, kalciumchlorid, stabilizátory

Konzervační prostředek: Gentamicin (0,1 g/l)

                                        5-chlor-2-methyl-4-isothiazol-3-on a 2-methyl-4-isothiazol-3-on
                                       (max 20 mg/l)

 

Manipulace s reagencií

Thromborel® S se nechá vytemperovat na laboratorní teplotu, rozpustí přesně v 10 ml injekční vody, 8-10 min se protřepe a nechá se 30 min. inkubovat v termostatu při při +37°C, před použitím opatrně promíchat nebo45 min.ve vodní lázni.

 

Stabilita a podmínky skladování

Neotevřený Thromborel®S reagent je stabilní při +2°C až +8oC až do data uvedeného na etiketě.

Stabilita po rekonstituci

Při +37oC

8 hod (otevřená lahvička)

Při +15°C až +25oC

96 hod (otevřená lahvička – v přístroji 

Při +2°C až +8oC

5 dnů (uzavřená lahvička)

Známka znehodnocení: změřený kontrolní vzorek neodpovídá deklarované hodnotě.

 

Způsob likvidace

Likviduje se jako biologický materiál.

 

 

OSN-SSpotřební materiálOSN-E

Kyvety do koagulometru, špičky, destilovaná voda.

 

Příprava k činnosti:

Provede se údržba koagulometru a příprava reagencií dle pracovní instrukce   PI-OKBH–88 Manuál Sysmex CS 2500. Reagencie se umístí do reagenčního kruhu.

 

OSN-SPracovní postup

Provede se kontrola reagencií a spotřebního materiálu, v případě potřeby se doplní. Provede se interní kontrola kvality, případně kalibrace. Vzorky se kontrolují na přítomnost hemolýzy, chylozity, přesnosti odběru.

V primárních zkumavkách s čárovým kódem jsou vzorky vkládány ve stojáncích do analyzátoru.OSN-E

Po provedení analýzy jsou výsledky automaticky odesílány do LIS a validovány laboratorním pracovníkem.

 

OSN-SStručný popis postupuOSN-E

1. primární zkumavku se vzorkem vložíme po centrifugami do stojanu

2. stojan se vzorky umístíme do analyzátoru

3. zmáčkneme tlačítko START na přístroji

 

Kalibrace metody a návaznost

Pro výsledky vyjádřené v INR není kalibrace nutná.

U testu PT při změně šarže změříme čas normální plazmy (5x změříme Standard human plazmu, vytiskneme a vypočteme průměrnou hodnotu), čas normální plazmy a hodnotu ISI aktualizujeme v přístroji.

Po aktualizaci údajů změříme kontrolní vzorky (atestovanou kontrolní plazmu), výsledky zapíšeme do formuláře F-OKBH-80, vytiskneme a založíme do složky u analyzátoru. Viz.PI-OKBH – Provedení kalibrace u koagulací.

 

Příprava kalibračního materiálu:

Standard Human Plasma se rozpustí přesně v 1 ml injekční vody, promíchá se a nechá se stát při +15°C až +25oC 30 min. Před použitím se opět opatrně promíchá.
Stabilita po rekonstituci:

Při +15°C až +25oC                4 hod
Při –20oC                                1 měsíc

 

Charakteristika spolehlivosti:

Charakteristika spolehlivosti, specifické vlastnosti testu, srovnání metod viz aplikační listy pro Tromborel S pro stanovení PT na CS 2500.

 

Aktuální charakteristiky spolehlivosti:

Aktuální charakteristiky spolehlivosti jsou uvedeny v platném verifikačním protokole.

 

OSN-SDokumentace, zpracování dat a vydávání výsledků

Výsledky stanovení jsou uloženy v softwaru analyzátoru, zálohují se na server VTN. 

Výsledky vyšetření zanesené v LIS laboratoře se archivují v elektronické podobě.OSN-E

OSN-E Likvidace se řídí skartačním řádem.

Lékařům na odděleních a ambulancích Nemocnice Agel Ostrava-Vítkovice a.s. jsou výsledky vyšetření k dispozici elektronicky v NIS a v případě potřeby v tištěné podobě u příjmového okna v laboratoři.

 

Spolupracujícím lékařům jsou výsledky zasílány průběžně elektronicky a následující den doručovány v tištěné podobě se svozem biologického materiálu.

Výsledková zpráva obsahuje:

·        identifikaci laboratoře, která výsledek vydala

·        odkaz na akreditaci laboratoře

·        datum a čas vydání nálezu

·        jednoznačnou identifikaci pacienta

·        zdravotní pojišťovnu pacienta

·        identifikaci požadujícího subjektu (lokalizaci pacienta, je-li to vhodné)

·        identifikaci požadujícího lékaře (resp. oddělení)

·        diagnózu pacienta

·        druh biologického materiálu (sérum, plazma, moč, krev u vyšetření krevního obrazu)

·        jasně srozumitelnou identifikaci vyšetření

·        datum a čas přijetí vzorku laboratoří

·        datum a čas odběru vzorku

·        výsledek vyšetření s odpovídajícími jednotkami (nejčastěji SI jednotky)

·        označení akreditované metody

·        referenční intervaly vyšetření

·        interpretaci výsledků, je-li to nutné

·        jiné poznámky (např. kvalita nebo dostatečnost primárního vzorku, pokud tato může nežádoucím způsobem ovlivnit výsledek požadovaného vyšetření)

·        identifikaci osob, které výsledkovou zprávu kontrolovaly a schválily

·        zkratky identifikující žádanku

·         př. 20.BR-0777

·         20: den v měsíci, BR: biochemie rutina, 0777: číslo vzorku

·         př. 20.HH-0777

·         20: den v měsíci, HH: hematologie, 0777: číslo vzorku

 

Referenční rozmezí a varovná rozmezíOSN-SRRRR

Způsob vydávání výsledků:

Protrombinový čas pacienta (tp) v sekundách

Protrombinový poměr (PT-ratio) – tp/tn

Hodnota INR

Referenční rozmezí:

 

PT-ratio:                         0   -1M              0,8-1,5

1M-6M               0,8-1,4

                                     6M-150 let        0,8-1,2

 

Při terapii antagonisty K vitaminu jsou doporučena tato léčebná rozmezí: 1,5 – 2,5 INR

Pokud pacient není léčen antagonisty vitaminu K, není vhodné k vyjádření PT používat hodnotu INR.

 

OSN-SInterpretace výsledků, konzultační činnosti a hlášeníOSN-E

Klinické použití: U poruch jaterního parenchymu a u koagulopatií jiného typu s poruchou tvorby aktivátorů protrombinu. Monitorování antikoagulační léčby založené na antagonistech vitamínu K.

Při léčbě antagonisty K vitaminu klesá jako jeden z prvních faktorů hladina proteinu C a S. Proto je v úvodu podávání nebezpečí vzniku trombózy (kumarinové nekrózy). Přitom čas koagulace je normální. V této fázi, pokud vyšetřujeme hladiny proteinu C a S je INR normální, ale hladiny těchto proteinů již snížené.

 

Měření PT pomocí Thromborelu® S slouží jako rychlý a citlivý screeningový test pro stanovení koagulačních poruch v exogenním systému (faktory II, V, VII, X). Z důvodu jeho vysoké citlivosti k těmto koagulačním faktorům je především určen:

·       pro nastavení a  kontrolu orální antikoagulační terapie

·      pro zachycení geneticky podmíněných deficitů koagulačních faktorů exogenního systému

·      pro zachycení získaných deficitů koagulačních faktorů

·      pro zjištění schopnosti hepatické syntézy při jaterních onemocněních

Pomocí Thromborelu® S a odpovídající deficitní plasmy je možno stanovit aktivitu jednotlivých koagulačních faktorů II, V, VII, X.

 

OSN-SŘízení kvalityOSN-E

Pro denní kontrolu správnosti se používá normální a patologická kontrolní plazma. Používáme dlouhodobě jednu šarži kontrolního materiálu.

Variační koeficient analytického systému pro stejnou šarži kontrolní plazmy musí být menší než 5%.

 

IKK se provádí dle  PI-OKBH-32 Vnitřní kontrola kvality-koagulace

 

Při výměně reagencie stejné šarže se provede kontrola pacientským vzorkem. Výsledky jsou kontrolovány laboratorním pracovníkem. Rozdíl výsledků měření nesmí přesáhnout nejistotu měření dané metody

 

Externí kontrola kvality v rámci České republiky je organizována SEKK, laboratoř se jí účastní 2x ročně.

Poznámky

Zkoagulovanou plazmu netestujeme.
U ikterických plazem je nutno mít na paměti jaterní poruchu a tím ovlivněné koagulační výsledky.
Zdroje chyb při získávání plazmy:

§  nadměrná venostáza před odběrem krve

§  odebraná krev obsahuje tkáňový tromboplastin (způsobeno chybnou venepunkcí)

§  intenzivní třepání krve s citrátem

§  faktor V je inaktivován dlouhodobým skladováním plazmy při teplotě místnosti

§  chybná centrifugační technika

§  přítomnost stromat erytrocytů, které vyvolávají koagulaci.

Při hematokritu méně než 0,25 a více než 0,60 není přesně zachován poměr citrátu a plazmy

Výpočet množství citrátu potřebného pro takový vzorek se počítá

Ml citrátu = (100-hematokrit/595-hematokrit) x ml plné krve

OSN-SLiteraturaOSN-E

·         SLP

·         Firemní příbalový leták k soupravě, aplikační listy

·         Doporučení ČHS ČLS JEP k vyjadřování výsledku protrombinového testu, 2019

·         Doporučení ČHS ČLS JEP Referenční meze pro koagulační stanovení u dětí a dospělých, 2019

·         Doporučení ČHS ČLS JEP Preanalytika v hematologické laboratoři, 2021

·         Ricos C, Alvarez V, Cava F, Garcia-Lario JV, Hernandez A, Jimenez CV, Minchinela J, Perich C, Simon M. "Current databases on biologic variation: pros, cons and progress." Scand J Clin Lab Invest 1999;59:491-500.2014

 

OSN-SAppendixyOSN-E

nevyplněno.

 

OSN-SAutorské poznámkyOSN-E

nevyplněno

 

Recenze a schválení

Autor a spoluautoři: Mgr. Eva Miková