Abstrakt
Stanovení
protrombinového času pomocí reagencie Tromborel S. Test monitoruje vnější cestu
aktivace přeměny protrombinu na trombin.
Seznam souvisejících
dokumentů
Laboratorní
příručka
Příručka
kvality
Provozní
řád
Skartační
řád
S-OKBH-004
Směrnice pro IKK-OKBH
S-OKBH-005
Směrnice EHK
SOPT-
Sysmex CS 2500
LP C-11
Informace k transportu vzorku
PI-OKBH-88
Manuál pro analyzátor Sysmex CS 2500
PI-OKBH-32
Provedení kontrol koagulace
PI-OKBH-59
Provedení kalibrace-koagulace
Uživatelský
manuál Sysmex
Kódy, názvy, definice a
terminologie
Protrombinový test
Reagenční souprava: Thromborel®S
reagent, kat.č. OUHP 49
Název v lokálním
číselníků LIS: Protrombinový test
Klíč v lokálním
číselníků LIS: PT
Číslo metody
v lokálním číselníku LIS: 852
Kód metody
v analyzátoru Sysmex CS 2500: 04
Seznam zdravotních
výkonů VZP: 96623
Rutinní
metoda.
PT = tromboplastinový
test = protrombinový test = prothrombine time
INR =
normalizovaný poměr = international normalized ratio
ISI =
index citlivosti tromboplastinu = international senzitivity index
Princip
Při
inkubaci plazmy s optimálním množstvím tromboplastinu a kalciových iontů
je vyvolána koagulace. Měří se čas do vzniku fibrinového koagula.
Místo provádění postupu
OKBH,
úsek koagulace, Vítkovická nemocnice a.s., Zalužanského 1192/15,70384
Ostrava-Vítkovice
Bezpečnostní aspekty
Je nutné dodržovat obecné zásady
bezpečnosti práce podle ČSN 01 8003, směrnice VN BOZP č.8.02, ale i zásady
práce s biologickým materiálem, který může být zdrojem přenosu některých
infekcí. Zejména je třeba zachovávat pravidla osobní hygieny, používat osobní
ochranné pracovní prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci nejíst, nepít
a nekouřit. Po práci a před jídlem omýt pokožku především rukou teplou
vodou a mýdlem a ošetřit vhodným reparačním krémem. Při zasažení očí
vymývat velkým množstvím vlažné vody nejméně 15 minut. Při zasažení oděvu a
kůže odložit veškeré kontaminované oblečení. Okamžitě kůži omýt velkým
množstvím, pokud možno vlažné vody, popř. mýdlem nebo jiným vhodným mycím
prostředkem. Po umytí ošetřit vhodným reparačním krémem. Při náhodném
požití vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru vody a vyhledat lékařskou
pomoc.
Fáze
před vyšetřením
Měření
PT pomocí Thromborelu® S slouží jako rychlý a citlivý screeningový
test pro stanovení koagulačních poruch v exogenním systému (faktory II, V, VII,
X).
Odběr primárního vzorku a transport
Odběr
Plazma: Odběr se provádí standardním
způsobem ze žilní krve, do plastové zkumavky s 3,2%
citrátem sodným, je nutné dodržet přesný poměr protisrážlivého činidla a
krve (1:9) –
tolerance 10%, pro obvyklé vyšetřování je
vhodný odběr ráno po 12 hod. lačnění.
Transport
Transport materiálu na oddělení OKBH VN je popsán
v laboratorní příručce LP C-11 Informace k transportu
vzorků. Transport materiálu musí být šetrný, rychlý, při teplotě +
Skladování
Plazma se po provedení analýzy skladuje při laboratorní
teplotě. Plazma nesmí být skladována
v lednici! Doba dodatečně požadovaných vyšetření se řídí podle seznamu
uvedeném v LP C-03 Ústní požadavky na vyšetření.
Interference
Stanovení ovlivňuje hemolýza a
lipémie.
Stabilita
analytu v primárním vzorku a v plazmě
+
Omezení
Laboratoř
může odmítnout přijetí materiálu a neprovést požadované vyšetření
z obecných důvodů uvedených v Laboratorní příručce v kapitole
Kritéria pro přijetí nebo odmítnutí primárních vzorků, a pokud je extrémně
překročena mimolaboratorní doba odezvy.
Manipulace
se vzorky
Manipulace se vzorky probíhá podle běžných zásad práce s biologickým infekčním
materiálem uvedených v Laboratorní příručce a Příručce kvality.
Primární zkumavka
s biologickým materiálem je centrifugována 15 minut při rychlosti
Přístroje
a pomůcky
Centrifuga Eppendorf 5702, centrifuga Hettich EBA
200S, automatické analyzátory
Sysmex CS 2500-A (výrobní číslo 23894) a Sysmex CS
2500-B (výrobní číslo 25146)
Reagencie
Výrobce/dodavatel: Siemens s.r.o,
Evropská 873,664 42 Modřice
Balení 10 x pro 10 ml
Složení
Thromborel®S reagent:
lyofilizovaný tromboplastin z humánní placenty, kalciumchlorid, stabilizátory
Konzervační prostředek: Gentamicin (0,1 g/l)
5-chlor-2-methyl-4-isothiazol-3-on a
2-methyl-4-isothiazol-3-on
(max 20 mg/l)
Manipulace s reagencií
Thromborel® S se nechá
vytemperovat na laboratorní teplotu, rozpustí přesně v 10 ml injekční
vody, 8-10 min se protřepe a nechá se 30 min. inkubovat v termostatu při
při +37°C, před použitím
opatrně promíchat nebo45 min.ve vodní lázni.
Stabilita a podmínky skladování
Neotevřený Thromborel®S
reagent je stabilní při +
Stabilita po rekonstituci |
|
Při +37oC
|
8 hod (otevřená
lahvička) |
Při + |
96 hod (otevřená
lahvička – v přístroji |
Při + |
5 dnů (uzavřená
lahvička) |
Známka znehodnocení: změřený
kontrolní vzorek neodpovídá deklarované hodnotě.
Způsob likvidace
Likviduje se jako biologický
materiál.
Spotřební materiál
Kyvety do koagulometru, špičky, destilovaná voda.
Příprava k činnosti:
Provede se údržba koagulometru a příprava reagencií dle pracovní
instrukce PI-OKBH–88 Manuál Sysmex CS
2500. Reagencie se umístí do reagenčního kruhu.
Pracovní postup
Provede se kontrola reagencií a spotřebního
materiálu, v případě potřeby se doplní. Provede se interní kontrola kvality,
případně kalibrace. Vzorky se kontrolují na přítomnost hemolýzy, chylozity,
přesnosti odběru.
V primárních zkumavkách s čárovým kódem
jsou vzorky vkládány ve stojáncích do analyzátoru.
Po
provedení analýzy jsou výsledky automaticky odesílány do LIS a validovány
laboratorním pracovníkem.
Stručný popis postupu
1.
primární zkumavku se vzorkem vložíme po centrifugami do stojanu
2. stojan se vzorky umístíme do
analyzátoru
3. zmáčkneme tlačítko START na
přístroji
Kalibrace metody a návaznost
Pro
výsledky vyjádřené v INR není kalibrace nutná.
U testu PT při změně šarže
změříme čas normální plazmy (5x změříme Standard human plazmu, vytiskneme a
vypočteme průměrnou hodnotu), čas normální plazmy a hodnotu ISI aktualizujeme
v přístroji.
Po aktualizaci údajů změříme
kontrolní vzorky (atestovanou kontrolní plazmu), výsledky zapíšeme do formuláře
F-OKBH-80, vytiskneme a založíme do složky u analyzátoru. Viz.PI-OKBH –
Provedení kalibrace u koagulací.
Příprava kalibračního
materiálu:
Standard Human Plasma se rozpustí přesně v 1 ml injekční
vody, promíchá se a nechá se stát při +
Stabilita po rekonstituci:
Při +
Při –20oC 1 měsíc
Charakteristika spolehlivosti:
Charakteristika spolehlivosti, specifické vlastnosti
testu, srovnání metod viz aplikační listy pro Tromborel S pro stanovení PT
na CS 2500.
Aktuální charakteristiky spolehlivosti:
Aktuální charakteristiky spolehlivosti jsou uvedeny v platném
verifikačním protokole.
Dokumentace,
zpracování dat a vydávání výsledků
Výsledky stanovení jsou uloženy v softwaru analyzátoru, zálohují se
na server VTN.
Výsledky vyšetření zanesené
v LIS laboratoře se archivují v elektronické podobě.
Likvidace se
řídí skartačním řádem.
Lékařům
na odděleních a ambulancích Nemocnice Agel Ostrava-Vítkovice a.s. jsou výsledky
vyšetření k dispozici elektronicky v NIS a v případě
potřeby v tištěné podobě u příjmového okna v laboratoři.
Spolupracujícím
lékařům jsou výsledky zasílány průběžně elektronicky a následující den
doručovány v tištěné podobě se svozem biologického materiálu.
Výsledková zpráva obsahuje:
·
identifikaci laboratoře, která výsledek vydala
·
odkaz
na akreditaci laboratoře
·
datum a čas vydání nálezu
·
jednoznačnou identifikaci pacienta
·
zdravotní
pojišťovnu pacienta
·
identifikaci
požadujícího subjektu (lokalizaci pacienta, je-li to vhodné)
·
identifikaci
požadujícího lékaře (resp. oddělení)
·
diagnózu
pacienta
·
druh
biologického materiálu (sérum, plazma, moč, krev u vyšetření krevního obrazu)
·
jasně srozumitelnou identifikaci vyšetření
·
datum a
čas přijetí vzorku laboratoří
·
datum a
čas odběru vzorku
·
výsledek
vyšetření s odpovídajícími jednotkami (nejčastěji SI jednotky)
·
označení
akreditované metody
·
referenční
intervaly vyšetření
·
interpretaci výsledků, je-li to nutné
·
jiné
poznámky (např. kvalita nebo dostatečnost primárního vzorku, pokud tato může
nežádoucím způsobem ovlivnit výsledek požadovaného vyšetření)
·
identifikaci
osob, které výsledkovou zprávu kontrolovaly a schválily
·
zkratky
identifikující žádanku
·
př.
20.BR-0777
·
20: den
v měsíci, BR: biochemie rutina, 0777: číslo vzorku
·
př.
20.HH-0777
·
20: den
v měsíci, HH: hematologie, 0777: číslo vzorku
Referenční rozmezí a varovná rozmezí
Způsob vydávání výsledků:
Protrombinový čas pacienta (tp)
v sekundách
Protrombinový poměr (PT-ratio) – tp/tn
Hodnota INR
Referenční rozmezí:
PT-ratio: 0
-1M 0,8-1,5
1M-6M 0,8-1,4
6M-150 let 0,8-1,2
Při
terapii antagonisty K vitaminu jsou doporučena tato léčebná rozmezí: 1,5 – 2,5
INR
Pokud pacient není léčen antagonisty
vitaminu K, není vhodné k vyjádření PT používat hodnotu INR.
Interpretace výsledků, konzultační činnosti a
hlášení
Klinické použití: U poruch jaterního parenchymu a u
koagulopatií jiného typu s poruchou tvorby aktivátorů protrombinu. Monitorování
antikoagulační léčby založené na antagonistech vitamínu K.
Při léčbě antagonisty K vitaminu klesá jako jeden z
prvních faktorů hladina proteinu C a S. Proto je v úvodu podávání nebezpečí
vzniku trombózy (kumarinové nekrózy). Přitom čas koagulace je normální. V této
fázi, pokud vyšetřujeme hladiny proteinu C a S je INR normální, ale hladiny
těchto proteinů již snížené.
Měření PT
pomocí Thromborelu® S slouží jako rychlý a citlivý screeningový test
pro stanovení koagulačních poruch v exogenním systému (faktory II, V, VII, X).
Z důvodu jeho vysoké citlivosti k těmto koagulačním faktorům je především
určen:
·
pro
nastavení a kontrolu orální
antikoagulační terapie
· pro zachycení geneticky podmíněných
deficitů koagulačních faktorů exogenního systému
· pro zachycení získaných deficitů
koagulačních faktorů
· pro zjištění schopnosti hepatické syntézy
při jaterních onemocněních
Pomocí Thromborelu® S a odpovídající deficitní plasmy je možno
stanovit aktivitu jednotlivých koagulačních faktorů II, V, VII, X.
OSN-SŘízení kvality
Pro denní
kontrolu správnosti se používá normální a patologická kontrolní plazma.
Používáme dlouhodobě jednu šarži kontrolního materiálu.
Variační koeficient
analytického systému pro stejnou šarži kontrolní plazmy musí být menší než 5%.
IKK se provádí dle PI-OKBH-32 Vnitřní kontrola kvality-koagulace
Při výměně reagencie stejné
šarže se provede kontrola pacientským vzorkem. Výsledky jsou kontrolovány laboratorním pracovníkem. Rozdíl výsledků měření nesmí přesáhnout
nejistotu měření dané metody
Externí kontrola
kvality v rámci České republiky je organizována SEKK, laboratoř se jí účastní
2x ročně.
Zkoagulovanou plazmu
netestujeme.
U ikterických plazem je nutno mít na paměti jaterní poruchu a tím ovlivněné
koagulační výsledky.
Zdroje chyb při získávání plazmy:
§ nadměrná venostáza před odběrem krve
§ odebraná krev obsahuje tkáňový tromboplastin
(způsobeno chybnou venepunkcí)
§ intenzivní třepání krve s citrátem
§ faktor V je inaktivován dlouhodobým skladováním
plazmy při teplotě místnosti
§ chybná centrifugační technika
§ přítomnost stromat erytrocytů, které vyvolávají
koagulaci.
Při
hematokritu méně než
Výpočet množství citrátu potřebného pro takový vzorek
se počítá
Ml citrátu = (100-hematokrit/595-hematokrit) x ml plné
krve
Literatura
·
SLP
·
Firemní
příbalový leták k soupravě, aplikační listy
·
Doporučení
ČHS ČLS JEP k vyjadřování výsledku protrombinového testu, 2019
·
Doporučení
ČHS ČLS JEP Referenční meze pro koagulační stanovení u dětí a dospělých, 2019
·
Doporučení
ČHS ČLS JEP Preanalytika v hematologické laboratoři, 2021
·
Ricos C, Alvarez V,
Cava F, Garcia-Lario JV, Hernandez A, Jimenez CV, Minchinela J, Perich C, Simon
M. "Current databases on biologic variation: pros, cons and
progress." Scand J Clin Lab Invest 1999;59:491-500.2014
Appendixy
nevyplněno.
Autorské poznámky
nevyplněno
Recenze a schválení
Autor a spoluautoři: Mgr. Eva Miková