OSN-SAbstraktOSN-E

Stanovení koncentrace fibrinogenu v plazmě koagulační metodou podle Clausse.

Funkce fibrinogenu v hemostáze.

 

OSN-SSeznam souvisejících dokumentůOSN-E

Laboratorní příručka

Příručka kvality

Provozní řád

Skartační řád

S-OKBH-004 Směrnice pro IKK-OKBH

S-OKBH-005 Směrnice EHK

SOPT – Sysmex CS 2500

LP C-11 Informace k transportu vzorků

PI-OKBH-88 Manuál pro analyzátor Sysmex CS 2500

PI-OKBH-32 Provedení kontrol koagulace

PI-OKBH-59 Provedení kalibrace-koagulace

Uživatelský manuál Sysmex

 

OSN-SKódy, názvy, definice a terminologie

Fibrinogen

Reagenční souprava: Dade® Thrombin-Reagent,kat.č.  B4233-27

Název v lokálním číselníků LIS: Fibrinogen

Klíč v lokálním číselníků LIS: PFIBR

Číslo metody v lokálním číselníku LIS: 856

Kód metody v analyzátoru Sysmex CS 2500: 06OSN-E

Seznam zdravotních výkonů VZP: 96325

OSN-E

OSN-SPrincip

Enzym trombin mění rozpustný plasmaprotein fibrinogen na jeho nerozpustný polymer fibrin. Koagulační čas zředěné plasmy je nepřímo úměrný koncentraci fibrinogenu v plasmě. Na základě této zákonitosti vyvinul Clauss jednoduchý postup pro stanovení fibrinogenu, založený na měření koagulačního času zředěné plasmy po přidání trombinu. Takto dosažený koagulační čas se pak porovnává s koagulačním časem standardizovaného fibrinogenového preparátu.

OSN-E

OSN-SMísto provádění postupuOSN-E

OKBH, úsek koagulací, Nemocnice AGEL Ostrava-Vítkovice a.s., Zalužanského 1192/15,70384 Ostrava-Vítkovice

 

OSN-SBezpečnostní aspekty

Je nutné dodržovat obecné zásady bezpečnosti práce podle ČSN 01 8003, směrnice VN BOZP č.8.02, ale i zásady práce s biologickým materiálem, který může být zdrojem přenosu některých infekcí. Zejména je třeba zachovávat pravidla osobní hygieny, používat osobní ochranné pracovní prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci nejíst, nepít a nekouřit. Po práci a před jídlem omýt pokožku především rukou teplou vodou a mýdlem a ošetřit vhodným reparačním krémem. Při zasažení očí vymývat velkým množstvím vlažné vody nejméně 15 minut. Při zasažení oděvu a kůže odložit veškeré kontaminované oblečení. Okamžitě kůži omýt velkým množstvím, pokud možno vlažné vody, popř. mýdlem nebo jiným vhodným mycím prostředkem. Po umytí ošetřit vhodným reparačním krémem. Při náhodném požití vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru vody a vyhledat lékařskou pomoc.

 

OSN-SFáze před vyšetřením

Snížený obsah fibrinogenu nacházíme při získané nebo vrozené hypo-nebo afibrinogenemii:

a) získané hypo-nebo afibrinogenemii

Získané stavy s nedostatkem fibrinogenu nastupují zejména jako následek intravaskulární proteolysy firbrinogenu trombinem (spotřební koagulopatie např. v porodnictví, po chirurgických zásazích), hadím jedem nebo plasminem (primární hyperfibrinolysa po streptokinázové, urokinázové nebo tPA-terapii). Dále může docházet k hypofibrinogenemii při snížené produkci (při akutním nebo chronickém onemocnění jater), při ztrátách v intravaskulárním prostoru (např. při aszites nebo akutním krvácení event. popáleninách) nebo při zvýšeném odbourávání (při šoku nebo karcinomu).

b) u vrozených hypo-nebo afibrinogenemií

 

Přechodně zvýšené fibrinogenemie nacházíme tehdy, jestliže se fibrinogen chová jako protein akutní fáze:

a) Krátkodobé hypefibrinogenemie se mohou vyskytovat po operacích, úrazech, srdečním infarktu nebo infekcích.

b) Déle trvající hyperfibrinogenemie mohou být nalezeny při neoplasiích a chronických zánětlivých onemocněních.

Se vzrůstajícím věkem bývá pozorována stoupající koncentrace fibrinogenu. Zvýšená koncentrace fibrinogenu je rizikovým faktorem pro kardiovaskulární choroby.

 

Odběr primárního vzorku a transport

Odběr

           Plazma: Odběr se provádí standardním způsobem ze žilní krve, do plastové zkumavky s 3,2%

                          citrátem sodným, je nutné dodržet přesný poměr protisrážlivého činidla a krve (1:9) –

 tolerance 10%, pro obvyklé vyšetřování je vhodný odběr ráno po 12 hod. lačnění.

Transport

Transport materiálu na oddělení OKBH VTN je popsán v laboratorní příručce LP C-11 Informace k transportu vzorků. Transport materiálu musí být šetrný, rychlý, při teplotě +15°C až+25 °C. Doba transport by neměla být delší než 2 hod.

Skladování

Plazma se po provedení analýzy skladuje při laboratorní teplotě. Plazma nesmí být skladována v lednici! Doba dodatečně požadovaných vyšetření se řídí podle seznamu uvedeném v LP C-03 Ústní požadavky na vyšetření.

Stabilita analytu v primárním vzorku a v plazmě

+15°C až+ 25°C: 4 hodiny

 

Omezení

Laboratoř může odmítnout přijetí materiálu a neprovést požadované vyšetření z obecných důvodů uvedených v Laboratorní příručce v kapitole Kritéria pro přijetí nebo odmítnutí primárních vzorků, a pokud je extrémně překročena mimolaboratorní doba odezvy.

 

OSN-SManipulace se vzorky

Manipulace se vzorky probíhá podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem uvedených v Laboratorní příručce a Příručce kvality.

Primární zkumavka s biologickým materiálem je centrifugována 15 minut při rychlosti 2500 g.Pro vitální indikace ultracentrifugace 2 min.při 8000ot./min. Po centrifugaci se ihned provede stanovení. Vzorky obsahující sraženinu, vzorky, u kterých nebyl dodržen poměr krve a činidla a silně chylózní a hemolytické se nezpracovávají.OSN-E

 

 

OSN-SPřístroje a pomůckyOSN-E

Centrifuga Eppendorf 5702, centrifuga Hettich EBA 200S,automatické analyzátory

Sysmex CS 2500-A (výrobní číslo 23894) a Sysmex CS 2500-B ( výrobní číslo 25146)

 

OSN-SReagencie

Výrobce/dodavatel: Siemens s.r.o., Evropská 873,664 42 Modřice

Obsah balení

Balení 10 x 5 ml

 

Složení

Dade® Thrombin-Reagent: Lyofilizovaný hovězí trombin (přibližně 100 NIH/ml) se stabilizátory a pufry.


Další potřebné reagencie

Ovren veronal pufr, pH 7,5

Příprava reagencie

Dade® Thrombin-Reagent se rozpustí přesně v množství injekční vody uvedeném na etiketě. Lahvička se opět uzavře a nechá se stát 30 min. do úplného rozpuštění obsahu. Promíchá se krouživým pohybem. Netřepat. Před použitím se znovu opatrně promíchá.

Trombinový roztok se skladuje v originální lahvičce.

 

Stabilita a podmínky skladování

Neotevřený Dade®Thrombin reagent je stabilní při +2°C až +8oC až do data uvedeného na etiketě.

Stabilita po rekonstituci

Při +15°C až +25oC

 96 hod. (otevřená lahvička – v přístroji 

Při +2°C až +8oC

5 dní (uzavřená lahvička)

NEMRAZIT!

OSN-E

OSN-SSpotřební materiálOSN-E

Štítky s čárovými kódy, kyvety do koagulometru

 

OSN-SPracovní postup

Reagencie Dade®Thrombin Reagent  se umístí do koagulometru CS 2500 do reagenčního kruhu,

OVB do prostoru pro diluenty.

Provedeme identifikaci vzorku, vzorek vložíme do koagulometru do stojanu na vzorky a měření spustíme stisknutím klávesy “Start”. Viz. návod na obsluhu přístroje.

 

 

 

Sample Vol.

 

 

10 μl

 

Diluent Vol.

OVB

 

90 μl

 

Rinse

 

 

None

 

Second Dilution

 

 

0 μl

 

Diluent Vol.

None

 

0 μl

 

Rinse

 

 

None

 

Factor Plasma

None

 

0 μl

 

Rinse (Pre/Post)

None

 

None

 

First Reagent

Fbg

 

50 μl

 

Push-out Solution

No

 

0 μl

 

Rinse (Pre/Post)

None

X0

CLEAN I

X1

Second Reagent

None

 

0 μl

0 sec

Push-out Solution

No

 

0 μl

 

Rinse (Pre/Post)

None

X0

None

X0

Third Reagent

None

 

0 μl

0 sec

Push-out Solution

No

 

0 μl

 

Rinse (Pre/Post)

None

X0

None

X0

Detector

Clot

For Fbg

Sens/Wavelength

High Sens

 

Maximum Time

 

100 sec

 

 

 

OSOSN-SKalibrace a návaznost

Kalibrace se provádí na kalibrační materiál Standard Human Plasma s atestovanou hodnotou fibrinogenu cca 2,5 g/l vždy při změně šarže použité reagencie dle pracovní instrukce PI-OKBH-59 Provedení kalibrace-koagulace.

Nekalibrovat s čerstvě rozpuštěnou reagencií. Velmi citlivé na kvalitu pufru (OVB).

 

Ředění kalibrační křivky:

Jednotlivé body kalibrační křivky jsou nastaveny na následující poměry ředění kalibračního materiálu: 2/1, 3/2, 1/1, ½, 1/3. Všechny body jsou při kalibraci měřeny v dubletu a pro kalibrační křivku je použit průměr z obou stanovení.

Ředění se provádí Ovren veronalovým pufrem.

 

Příprava kalibračního materiálu:

Standard Human Plasma se rozpustí v 1 ml injekční vody, promíchá se a nechá se stát při +15°C - +25oC 30 min. Před použitím opatrně promíchat!

 

Stabilita po rekonstituci:

Při +15°C – +25oC 4 hod
Při –20oC 1 měsíc

Rozsah měření je dán rozsahem kalibrační křivky.

OSN-E

OSN-SCharakteristika spolehlivosti

 

Charakteristika spolehlivosti, specifické vlastnosti testu, srovnání metod viz aktuální aplikační listy pro fibrinogen pomocí Dade Trombin Reagent na CS 2500.

 

OSN-E Je-li koncentrace fibrinogenu nižší než rozsah kalibrační křivky, je nutné použít ředění plazmy menší, než stanovuje metoda, v případě, že je hladina fibrinogenu vyšší než rozsah měření, použije se ředění plazmy vyšší, než stanovuje metoda. Hranice, kdy se použije menší nebo větší ředění vzorku je určena aktuální kalibrační křivkou a může se pro různé kalibrace lišit. Koagulometr rutinně nabízí ředění 2/1 - poloviční ředění plasmy při měření vzorku pro nízké hladiny fibrinogenu, nebo ½

- dvojnásobné ředění plazmy pro vyšší hladiny fibrinogenu. V případě výrazně vyšších hodnot lze plazmu předředit manuálně. Při zvýšeném výskytu FDP dochází k prodloužení časů, neboť FDP polymerizaci fibrinu prodlužují.

Citlivost na heparin je malá vlivem zředěné plazmy a vysoké koncentrace trombinu.

Aktuální charakteristiky spolehlivosti:

Aktuální charakteristiky spolehlivosti jsou uvedeny v platném verifikačním protokolu.

 

OSN-SDokumentace, výpočty, zpracování dat a vydávání výsledkůOSN-E

Výsledky stanovení jsou uloženy v softwaru analyzátoru, záluhují se na server VTN.

Výsledky vyšetření zanesené v LIS laboratoře se archivují v elektronické podobě.OSN-E

OSN-E Likvidace se řídí skartačním řádem.

Lékařům na odděleních a ambulancích Nemocnice Agel Ostrava-Vítkovice a.s. jsou výsledky vyšetření k dispozici elektronicky v NIS a v případě potřeby v tištěné podobě na příjmu OKBH.

Spolupracujícím lékařům jsou výsledky zasílány průběžně elektronicky a následující den doručovány v tištěné podobě se svozem biologického materiálu.

Výsledková zpráva obsahuje:

·        identifikaci laboratoře, která výsledek vydala

·        odkaz na akreditaci laboratoře

·        datum a čas vydání nálezu

·        jednoznačnou identifikaci pacienta

·        zdravotní pojišťovnu pacienta

·        identifikaci požadujícího subjektu (lokalizaci pacienta, je-li to vhodné)

·        identifikaci požadujícího lékaře (resp. oddělení)

·        diagnózu pacienta

·        druh biologického materiálu (sérum, plazma, moč, krev u vyšetření krevního obrazu)

·        jasně srozumitelnou identifikaci vyšetření

·        datum a čas přijetí vzorku laboratoří

·        datum a čas odběru vzorku

·        výsledek vyšetření s odpovídajícími jednotkami (nejčastěji SI jednotky)

·        označení akreditované metody

·        referenční intervaly vyšetření

·        interpretaci výsledků, je-li to nutné

·        jiné poznámky (např. kvalita nebo dostatečnost primárního vzorku, pokud tato může nežádoucím způsobem ovlivnit výsledek požadovaného vyšetření)

·        identifikaci osob, které výsledkovou zprávu kontrolovaly a schválily

·        zkratky identifikující žádanku

·         př. 20.BR-0777

·         20: den v měsíci, BR: biochemie rutina, 0777: číslo vzorku

·         př. 20.HH-0777

·         20: den v měsíci, HH: hematologie, 0777: číslo vzorku

 

OSN-SReferenční a varovná rozmezí

Fyziologické hodnoty: 0 -  1 rok              1,50 -  3,40 g/l

                                   1 -   6 let                         1,70 – 4,00 g/l

                                          6 – 11 let    1,55 -  4,00 g/l

                                         11 – 16 let   1,55 – 4,50 g/l

                                         16 – 18 let            1,60 -  4,20 g/l

                                          >18 let        1,80 -  4,20 g/l

 

 

OSN-SInterpretace výsledků, konzultační činnosti a hlášení

Klinické použití: jako protein akutní fáze se zvyšuje při zátěžích jako je poranění, záněty, neoplastická onemocnění, akutní interní stavy (IM, NCPM) a v těhotenství. Hladina nad 4 g/l je považována za trombofilní riziko. Snížené hodnoty jsou u afibrinogenémií, hypofibrinogenémií, u některých dysfibrinogenémií, u některých forem DIC, při fibrinolytické léčbě a u některých těžších poruch jaterního parenchymu.

Vyšší hodnoty lze někdy zjistit u zánětlivých a neoplastických onemocnění, u některých dysfibrinogenemií a častěji u akutních interních stavů (IM, NCPM) a v těhotenství.

OSN-E

OSN-SŘízení kvalityOSN-E

Pro denní kontrolu přesnosti se používá normální a patologická kontrolní plazma.

Viz. PI-OKBH-Provedení kontrol koagulace, S-OKBH-004 Směrnice pro IKK

Externí kontrola kvality viz. S-OKBH-005 Směrnice EHK.

Variační koeficient analytického systému pro stejnou šarži kontrolní plazmy musí být menší než 10%.

Při změně reagencie stejné šarže se provede kontrola pacientským vzorkem. Rozdíl výsledků měření nesmí přesáhnout nejistotu měření dané metody

Při změně šarže použité reagencie se provede kalibrace.

Příprava kontrolního materiálu: Rozpuštění lahvičky s lyofilizátem v 1 ml injekční vody, nechat stát 30 min při 15 – 25oC, před použitím opatrně promíchat

Stabilita po rekonstituci:

Při 15 – 25oC                       4 hod
Při –20oC                              1 měsíc

 

OSN-SPoznámkyOSN-E

·         Zkoagulovanou plazmu netestujeme.
U ikterických plazem je nutno mít na paměti jaterní poruchu a tím ovlivněné koagulační výsledky.
Ikterita ani hemolýza nemá vliv na optické měření.
Chylozní plazmy do obsahu TG 900 mg/l stanovení neruší.

·         Zdroje chyb při získávání plazmy:

§  nadměrná venostáza před odběrem krve

§  odebraná krev obsahuje tkáňový tromboplastin (způsobeno chybnou venepunkcí)

§  intenzivní třepání krve s citrátem

§  faktor V je inaktivován dlouhodobým skladováním plazmy při teplotě místnosti

§  chybná centrifugační technika

§  přítomnost stromat erytrocytů, které vyvolávají koagulaci.

 

OSN-SLiteraturaOSN-E

SLP

Firemní příbalové letáky k soupravě a aplikační listy.

Doporučení ČHS ČLS JEP Referenční meze pro koagulační stanovení u dětí a dospělých, 2018

Doporučení ČHS ČLS JEP Preanalytika v hematologické laboratoři, 2021

Ricos C, Alvarez V, Cava F, Garcia-Lario JV, Hernandez A, Jimenez CV, Minchinela J, Perich C, Simon M. "Current databases on biologic variation: pros, cons and progress." Scand J Clin Lab Invest 1999;59:491-500.2014

 

OSN-SAutorské poznámkyOSN-E

nevyplněno

 

OSN-SRecenze, schválení

Autor: Mgr. Miková Eva