Abstrakt
Stanovení
aktivovaného parciálního tromboplastinového času reagencií Pathromtin SL firmy
Siemens s.r.o.
Funkce
aktivace přeměny protrombinu na trombin.
Seznam souvisejících
dokumentů
Laboratorní
příručka
Příručka
kvality
Provozní
řád
Skartační
řád
S-OKBH-004
Směrnice pro IKK-OKBH
S-OKBH-005
Směrnice EHK
SOPT-
Sysmex CS 2500
LP C-11
Informace k transportu vzorků
PI-OKBH-88
Manuál pro analyzátor Sysmex CS 2500
PI-OKBH-32
Provedení kontrol koagulace
PI-OKBH-59
Provedení kalibrace-koagulace
Uživatelský
manuál Sysmex
Kódy, názvy, definice a
terminologie
APTT = aktivovaný
parciální tromboplastinový čas = activated partial thromboplastin time
Reagenční souprava: Pathromtin SL 10x5ml, kat.č. OQGS
Název v lokálním
číselníků LIS: Aktivovaný parciální tromboplastinový test
Klíč v lokálním
číselníků LIS: PAPTT
Číslo metody
v lokálním číselníku LIS: 850
Kód metody
v analyzátoru Sysmex CS 2500: 36
Seznam zdravotních
výkonů VZP: 96621
Princip
Faktory
vnitřního koagulačního systému jsou aktivovány inkubací plazma
s optimálním množstvím fosfolipidů a povrchovým aktivátorem. Přidání
kalciových iontů spouští proces koagulace a poté se měří čas do vytvoření
koagula.
Místo provádění postupu
OKBH,
úsek koagulační, Nemocnice AGEL
Ostrava-Vítkovice a.s., Zalužanského 1192/15,703 84 Ostrava-Vítkovice
Bezpečnostní aspekty
Je nutné
dodržovat obecné zásady bezpečnosti práce podle ČSN 01 8003, směrnice VN BOZP
č.8.02, ale i zásady práce s biologickým materiálem, který může být zdrojem
přenosu některých infekcí. Zejména je třeba zachovávat pravidla osobní hygieny,
používat osobní ochranné pracovní prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci
nejíst, nepít a nekouřit. Po práci a před jídlem omýt pokožku především
rukou teplou vodou a mýdlem a ošetřit vhodným reparačním krémem. Při
zasažení očí vymývat velkým množstvím vlažné vody nejméně 15 minut. Při
zasažení oděvu a kůže odložit veškeré kontaminované oblečení. Okamžitě kůži
omýt velkým množstvím, pokud možno vlažné vody, popř. mýdlem nebo jiným vhodným
mycím prostředkem. Po umytí ošetřit vhodným reparačním krémem. Při náhodném
požití vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru vody a vyhledat lékařskou
pomoc.
Fáze před vyšetřením
Stanovení aktivovaného parciálního
tromboplastinového času (APTT) je globální screeningový test, který se primárně
používá k posouzení endogenního koagulačního systému, současně však tento
test ukazuje na těžké funkční defekty faktoru II, V, X nebo fibrinogenu.
Stanovení APTT je kromě toho všeobecně uznávaný test pro sledování heparinové
terapie, přičemž prodloužení koagulačního času je úměrné koncentraci heparinu.
U pacientů s orální antikoagulační terapií lze rovněž očekávat prodloužené
APTT, jelikož u těchto pacientů jsou sníženy cirkulující faktory II, V, VII, IX
a X. Přítomnost nespecifických inhibitorů jako Lupus anticoagulans a podobných
substancí může sice vést rovněž k prodloužení APTT, tento efekt je však
variabilní a zpravidla bývá připisován i složení použité APTT – reagencie.
Všeobecně lze říci, že APTT je klinicky významný screeningový test
s širokými možnostmi použití při diagnose koagulačních poruch a při
sledování pacientů se sklony ke krvácivosti nebo trombózám.
Odběr primárního vzorku a
transport
Odběr
Plazma: Odběr se provádí standardním způsobem ze žilní
krve, do plastové zkumavky s 3,2%
citrátem sodným, je nutné dodržet přesný poměr
protisrážlivého činidla a krve (1:9) –
tolerance 10 %, pro
obvyklé vyšetřování je vhodný odběr ráno po 12 hod. lačnění.
Transport
Transport
materiálu na oddělení OKBH VTN je popsán v laboratorní příručce LP C-11 Informace k transportu vzorků. Transport materiálu
musí být šetrný, rychlý, při teplotě +
Skladování
Plazma se po
provedení analýzy skladuje při laboratorní teplotě. Pokud není stanovení
provedeno do 1 hod. po centrifugaci, měla by být plazma přenesena do jiné
zkumavky.
Plazma nesmí být skladována v lednici!
Doba dodatečně požadovaných vyšetření se řídí podle seznamu uvedeném v LP C-03 Ústní požadavky na vyšetření.
Interference
Stanovení může ovlivnit hemolýza a lipémie.
Stabilita analytu
v primárním vzorku a v plazmě
+
Omezení
Laboratoř může odmítnout přijetí materiálu a neprovést
požadované vyšetření z obecných důvodů uvedených v Laboratorní
příručce v kapitole Kritéria pro přijetí nebo odmítnutí primárních vzorků,
a pokud je extrémně překročena mimolaboratorní doba odezvy.
Manipulace se vzorky
Manipulace
se vzorky probíhá podle běžných zásad práce
s biologickým infekčním materiálem uvedených v Laboratorní příručce a
Příručce kvality.
Primární zkumavka s biologickým materiálem je
centrifugována 15 minut při rychlosti
Přístroje a pomůcky
Centrifuga Eppendorf 5702, centrifuga Hettich EBA
200S, automatické analyzátory
Sysmex CS 2500-A (výrobní číslo 23894) a Sysmex CS
2500-B (výrobní číslo 25146)
Reagencie
Výrobce/dodavatel: Siemens s.r.o., Evropská 873,664
42 Modřice
Složení: Pathromtin SL pro stanovení APTT: rostlinné fosfolipidy
0,25 g/l,siliciumdioxid 1,2 g/l
Manipulace s reagencií
Reagencie je kapalná, připravená
k použití. Před použitím opatrně převrácením 5-8 x promíchat.
Stabilita a podmínky skladování
Neotevřený Pathromtin SL stabilní
při +
Stabilita po prvním otevření |
|
V přístroji |
96 hod (otevřená lahvička –
v přístroji |
Při + |
7 dní (po otevření) |
NEMRAZIT!
Způsob likvidace
Likviduje se jako biologický odpad.
Reagencie neobsažené v setu:
1. CA
Systém buffer
Výrobce/dodavatel: Siemens
s.r.o., Evropská 873,664 42 Modřice
Složení: 2,84x10-2m barbital
sodný v 1,25x10-1M roztoku chloridu sodného, pH 7,35±0,1
Skladování: +
Stabilita: uzavřené při +
v přístroji 60 hod.
2.CaCl2
0,025 mol/l
Výrobce/dodavatel: Siemens
s.r.o., Evropská 873,664 42 Modřice
Složení: roztok 0,025mol/l
CaCl2
Skladování: při +
Stabilita: při +
v přístroji 48 hod.
Spotřební materiál
Kyvety do koagulometru, destilovaná voda, špičky.
Příprava
k činnosti:
Provede se údržba koagulometru a příprava reagencií dle pracovní
instrukce PI-OKBH-88 Manuál Sysmex CS 2500. Reagencie se umístí do reagenčního
kruhu. Pufr do prostoru pro diluenty.
Pracovní postup
Provede se kontrola reagencií a spotřebního
materiálu, v případě potřeby se doplní. Provede se interní kontrola kvality,
případně kalibrace. Vzorky se kontrolují na přítomnost hemolýzy, chylozity,
přesnosti odběru.
V primárních zkumavkách s čárovým kódem
jsou vzorky vkládány ve stojáncích do analyzátoru.
Po
provedení analýzy jsou výsledky automaticky odesílány do LIS a validovány
laboratorním pracovníkem.
Stručný popis postupu
1.
primární zkumavku se vzorkem vložíme po centrifugaci do stojanu
2.
stojan umístíme do analyzátoru
3.
zmáčkneme tlačítko START na přístroji
Kalibrace a návaznost
Test APTT není
kalibrován,je ověřen čas normální plazmy = při změně šarže změříme čas
kontrolního materiálu
Dade Ci-Trol control level 1
Výrobce/dodavatel: Siemens
s.r.o., Evropská 873,664 42 Modřice
Složení: lyofilizovaná
lidská plazma,stabilizátor,buffer
Skladování: při +
Stabilita: při +
8 hodin
Příprava:lahvičku vytemperujte na laboratorní teplotu,přidejte 1 ml
destilované vody a nechte 15 min.
rekonstituovat,před použitím opatrně
promíchat
Postup: 5 x změřit
hodnotu APTT a vypočítat průměrnou hodnotu,primární data vytisknout,aktualizovat
hodnotu normální plazmy v analyzátoru,změřit
atestovanou kontrolní plazmu
výsledky
zapsatdo formuláře F-OKBH-
Charakteristika
spolehlivosti:
Charakteristika spolehlivosti, specifické
vlastnosti testu, srovnání metod viz aktuální aplikační listy pro
Pathromtin SL pro stanovení APTT
na CS 2500.
Aktuální charakteristiky spolehlivosti:
Aktuální charakteristiky spolehlivosti jsou uvedeny v platném
verifikačním protokolu APTT.
Dokumentace,
zpracování dat a vydávání výsledků
Výsledky stanovení jsou uloženy v softwaru analyzátoru, záluhují se
na server VTN.
Výsledky vyšetření v LIS se
archivují v elektronické podobě.
Likvidace se řídí skartačním řádem.
Lékařům na odděleních a ambulancích Nemocnice
Agel Ostrava-Vítkovice a.s. jsou výsledky vyšetření k dispozici
elektronicky v NIS a v případě potřeby v tištěné podobě na
příjmu OKBH.
Spolupracujícím lékařům jsou výsledky zasílány
průběžně elektronicky a následující den doručovány v tištěné podobě
se svozem biologického materiálu.
Výsledková zpráva obsahuje:
·
identifikaci laboratoře, která výsledek vydala
·
odkaz
na akreditaci laboratoře
·
datum a čas vydání nálezu
·
jednoznačnou identifikaci pacienta
·
zdravotní
pojišťovnu pacienta
·
identifikaci
požadujícího subjektu (lokalizaci pacienta, je-li to vhodné)
·
identifikaci
požadujícího lékaře (resp. oddělení)
·
diagnózu
pacienta
·
druh
biologického materiálu (sérum, plazma, moč, krev u vyšetření krevního obrazu)
·
jasně srozumitelnou identifikaci vyšetření
·
datum a
čas přijetí vzorku laboratoří
·
datum a
čas odběru vzorku
·
výsledek
vyšetření s odpovídajícími jednotkami (nejčastěji SI jednotky)
·
označení
akreditované metody
·
referenční
intervaly vyšetření
·
interpretaci výsledků, je-li to nutné
·
jiné
poznámky (např. kvalita nebo dostatečnost primárního vzorku, pokud tato může
nežádoucím způsobem ovlivnit výsledek požadovaného vyšetření)
·
identifikaci
osob, které výsledkovou zprávu kontrolovaly a schválily
·
zkratky
identifikující žádanku
·
př.
20.BR-0777
·
20: den
v měsíci, BR: biochemie rutina, 0777: číslo vzorku
·
př.
20.HH-0777
·
20: den v měsíci, HH: hematologie, 0777:
číslo vzorku
Referenční a
varovná rozmezí
Výsledky
APTT jsou vydávány v sekundách a APTT-ratio.
Neléčení: 0D-28D: aPTT-ratio =
0,8 - 1,5
1M – 1R: aPTT-ratio =
0,8 - 1,3
1R – 11R: aPTT-ratio = 0,8 -
1,2
11R-16R: aPTT-ratio = 0,8 -
1,3
16R-150R: aPTT-ratio = 0,8 -
1,2
Léčení heparinem: aPTT-ratio = 2,0 - 4,0
Interpretace výsledků,
konzultační činnosti a hlášení
Klinické
použití: APTT obecně se využívá při
diagnóze koagulopatií s poruchou vnitřního koagulačního systému. Prodloužené časy
dostáváme při poruchách faktorů vnitřního koagulačního systému (VIII, IX, XI a
XII), u hemofilií, v přítomnosti látek s antitrombotickým účinkem (heparin).
Menší citlivost je na jaterní choroby a na léčbu antagonisty K vitaminu. APTT však nepostihuje faktory VII a XIII a
jakékoli změny v počtu či kvalitě trombocytů. Tento test se též používá ke
kontrole heparinové terapie.
Reagencie Pathromtin SL pro stanovení APTT je
reagencií s vysokou citlivostí k faktorům vnitřní cesty (VIII, IX, XI a XII),
heparinu i LA.
Řízení kvality:
IKK se provádí denně dle pracovní
instrukce PI-OKBH-32 Provedení kontrol koagulace.
Variační koeficient
analytického systému pro stejnou šarži kontrolní plazmy musí být menší než 5 %.
Externí kontrola kvality v rámci České republiky je
organizována SEKK, laboratoř se jí účastní 2x ročně.
Zkoagulovanou plazmu
netestujeme.
U ikterických plazem je nutno mít na paměti jaterní poruchu a tím ovlivněné
koagulační výsledky.
Zdroje chyb při získávání plazmy:
§ nadměrná venostáza před odběrem krve
§ odebraná krev obsahuje tkáňový tromboplastin
(způsobeno chybnou venepunkcí)
§ intenzivní třepání krve s citrátem
§ faktor V je inaktivován dlouhodobým skladováním
plazmy při teplotě místnosti
§ chybná centrifugační technika
§ přítomnost stromat erytrocytů, které vyvolávají
koagulaci.
Jiné související informace
Pomocí APTT nelze monitorovat antikoagulační léčbu
pomocí nízkomolekulárních heparinů.
LMWH a Rivaroxaban (Xarelto) mírně zvyšují APTT.
Podávání nízkomolekulárních heparinů (např.
Fraxiparinne, Fragmin, Clexan) lze sledovat metodami založenými na stanovení
aktivity anti-Xa.
Test může být ovlivněn nerovnováhou v poměrech
aktivovaných faktorů a inhibitorů.
Literatura
SLP
Firemní příbalový leták k soupravě, aplikační listy.
Doporučení ČHS ČLS JEP Referenční
meze pro koagulační stanovení u dětí a dospělých, 2018
Doporučení ČHS ČLS JEP Preanalytika v hematologické laboratoři, 2021
Ricos C, Alvarez V, Cava F, Garcia-Lario JV,
Hernandez A, Jimenez CV, Minchinela J, Perich C, Simon M. "Current
databases on biologic variation: pros, cons and progress." Scand J Clin
Lab Invest 1999;59:491-500.2014
Appendixy
nevyplněno
Autorské poznámky
nevyplněno
Recenze, schválení
Autor: Mgr. Eva Miková