OSN-SAbstraktOSN-E

Stanovení aktivovaného parciálního tromboplastinového času reagencií Pathromtin SL firmy Siemens s.r.o.

Funkce aktivace přeměny protrombinu na trombin.

 

OSN-SSeznam souvisejících dokumentů

Laboratorní příručka

Příručka kvality

Provozní řád

Skartační řád

S-OKBH-004 Směrnice pro IKK-OKBH

S-OKBH-005 Směrnice EHK

SOPT- Sysmex CS 2500

LP C-11 Informace k transportu vzorků

PI-OKBH-88 Manuál pro analyzátor Sysmex CS 2500

PI-OKBH-32 Provedení kontrol koagulace

PI-OKBH-59 Provedení kalibrace-koagulace

Uživatelský manuál Sysmex

 

OSN-E

 

OSN-SKódy, názvy, definice a terminologie

APTT = aktivovaný parciální tromboplastinový čas = activated partial thromboplastin time

Reagenční souprava: Pathromtin SL 10x5ml, kat.č. OQGS

Název v lokálním číselníků LIS: Aktivovaný parciální tromboplastinový test

Klíč v lokálním číselníků LIS: PAPTT

Číslo metody v lokálním číselníku LIS: 850

Kód metody v analyzátoru Sysmex CS 2500: 36OSN-E

Seznam zdravotních výkonů VZP: 96621

OSN-E

OSN-SPrincip

Faktory vnitřního koagulačního systému jsou aktivovány inkubací plazma s optimálním množstvím fosfolipidů a povrchovým aktivátorem. Přidání kalciových iontů spouští proces koagulace a poté se měří čas do vytvoření koagula.

 

 OSN-SMísto provádění postupuOSN-E

OKBH, úsek koagulační, Nemocnice AGEL Ostrava-Vítkovice a.s., Zalužanského 1192/15,703 84 Ostrava-Vítkovice

 

OSN-SBezpečnostní aspektyOSN-E  

Je nutné dodržovat obecné zásady bezpečnosti práce podle ČSN 01 8003, směrnice VN BOZP č.8.02, ale i zásady práce s biologickým materiálem, který může být zdrojem přenosu některých infekcí. Zejména je třeba zachovávat pravidla osobní hygieny, používat osobní ochranné pracovní prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci nejíst, nepít a nekouřit. Po práci a před jídlem omýt pokožku především rukou teplou vodou a mýdlem a ošetřit vhodným reparačním krémem. Při zasažení očí vymývat velkým množstvím vlažné vody nejméně 15 minut. Při zasažení oděvu a kůže odložit veškeré kontaminované oblečení. Okamžitě kůži omýt velkým množstvím, pokud možno vlažné vody, popř. mýdlem nebo jiným vhodným mycím prostředkem. Po umytí ošetřit vhodným reparačním krémem. Při náhodném požití vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru vody a vyhledat lékařskou pomoc.

 

OSN-SFáze před vyšetřením

Stanovení aktivovaného parciálního tromboplastinového času (APTT) je globální screeningový test, který se primárně používá k posouzení endogenního koagulačního systému, současně však tento test ukazuje na těžké funkční defekty faktoru II, V, X nebo fibrinogenu. Stanovení APTT je kromě toho všeobecně uznávaný test pro sledování heparinové terapie, přičemž prodloužení koagulačního času je úměrné koncentraci heparinu. U pacientů s orální antikoagulační terapií lze rovněž očekávat prodloužené APTT, jelikož u těchto pacientů jsou sníženy cirkulující faktory II, V, VII, IX a X. Přítomnost nespecifických inhibitorů jako Lupus anticoagulans a podobných substancí může sice vést rovněž k prodloužení APTT, tento efekt je však variabilní a zpravidla bývá připisován i složení použité APTT – reagencie. Všeobecně lze říci, že APTT je klinicky významný screeningový test s širokými možnostmi použití při diagnose koagulačních poruch a při sledování pacientů se sklony ke krvácivosti nebo trombózám.OSN-E

 

OSN-SOdběr primárního vzorku a transport

Odběr

Plazma: Odběr se provádí standardním způsobem ze žilní krve, do plastové zkumavky s 3,2%

citrátem sodným, je nutné dodržet přesný poměr protisrážlivého činidla a krve (1:9) –

tolerance 10 %, pro obvyklé vyšetřování je vhodný odběr ráno po 12 hod. lačnění.

Transport

Transport materiálu na oddělení OKBH VTN je popsán v laboratorní příručce LP C-11 Informace k transportu vzorků. Transport materiálu musí být šetrný, rychlý, při teplotě +15°C až +25 °C. Doba transportu by neměla překročit 2 hod.

Skladování

Plazma se po provedení analýzy skladuje při laboratorní teplotě. Pokud není stanovení provedeno do 1 hod. po centrifugaci, měla by být plazma přenesena do jiné zkumavky.

Plazma nesmí být skladována v lednici! Doba dodatečně požadovaných vyšetření se řídí podle seznamu uvedeném v LP C-03 Ústní požadavky na vyšetření.

Interference

Stanovení může ovlivnit hemolýza a lipémie.

Stabilita analytu v primárním vzorku a v plazmě

+15°C až + 25°C: 4 hodiny, při heparinové terapii se vzorek musí centrifugovat do 1 hod. po odběru.

 

OSN-SOmezeníOSN-E

Laboratoř může odmítnout přijetí materiálu a neprovést požadované vyšetření z obecných důvodů uvedených v Laboratorní příručce v kapitole Kritéria pro přijetí nebo odmítnutí primárních vzorků, a pokud je extrémně překročena mimolaboratorní doba odezvy.

 

OSN-SManipulace se vzorky

Manipulace se vzorky probíhá podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem uvedených v Laboratorní příručce a Příručce kvality.

Primární zkumavka s biologickým materiálem je centrifugována 15 minut při rychlosti 2500 g. Pro vitální indikace ultracentrifugace 2 min. při 8000ot./min. Po centrifugaci se ihned provede stanovení. Vzorky obsahující sraženinu, vzorky, u kterých nebyl dodržen poměr krve a činidla a silně chylózní a hemolytické vzorky se nezpracovávají.OSN-E

 

OSN-SPřístroje a pomůckyOSN-E

Centrifuga Eppendorf 5702, centrifuga Hettich EBA 200S, automatické analyzátory

Sysmex CS 2500-A (výrobní číslo 23894) a Sysmex CS 2500-B (výrobní číslo 25146)

 

OSN-SReagencie

Výrobce/dodavatel: Siemens s.r.o., Evropská 873,664 42 Modřice

Obsah balení: Balení 10 x 5 ml, kat.č. OQGS

Složení: Pathromtin SL pro stanovení APTT: rostlinné fosfolipidy 0,25 g/l,siliciumdioxid 1,2 g/l

 

Manipulace s reagencií

Reagencie je kapalná, připravená k použití. Před použitím opatrně převrácením 5-8 x promíchat.

OS

Stabilita a podmínky skladování

Neotevřený Pathromtin SL stabilní při +2°C až +8oC až do data uvedeného na etiketě.

 

Stabilita po prvním otevření

V přístroji

 96 hod (otevřená lahvička – v přístroji 

Při +2°C až +15oC

 7 dní (po otevření)

NEMRAZIT!

 

Způsob likvidace

Likviduje se jako biologický odpad.

 

Reagencie neobsažené v setu:

1. CA Systém buffer

Výrobce/dodavatel: Siemens s.r.o., Evropská 873,664 42 Modřice 

Složení: 2,84x10-2m barbital sodný v 1,25x10-1M roztoku chloridu sodného, pH 7,35±0,1

Skladování: +2°C až +8 °C

Stabilita: uzavřené při +2°C až +8 °C do data exspirace, po otevření 30 dnů při +15°C až +25 °C

              v přístroji 60 hod.

 

2.CaCl2 0,025 mol/l

Výrobce/dodavatel: Siemens s.r.o., Evropská 873,664 42 Modřice 

Složení: roztok 0,025mol/l CaCl2

Skladování: při +2°C až +25 °C

Stabilita: při +2°C až +25 °C do data exspirace, po otevření 8 týdnů při +2°C až +25°C

              v přístroji 48 hod.

             

 

OSN-SSpotřební materiálOSN-E

Kyvety do koagulometru, destilovaná voda, špičky.

 

Příprava k činnosti:

Provede se údržba koagulometru a příprava reagencií dle pracovní instrukce   PI-OKBH-88 Manuál Sysmex  CS 2500. Reagencie se umístí do reagenčního kruhu. Pufr do prostoru pro diluenty.

 

OSN-SPracovní postup

Provede se kontrola reagencií a spotřebního materiálu, v případě potřeby se doplní. Provede se interní kontrola kvality, případně kalibrace. Vzorky se kontrolují na přítomnost hemolýzy, chylozity, přesnosti odběru.

V primárních zkumavkách s čárovým kódem jsou vzorky vkládány ve stojáncích do analyzátoru.OSN-E

Po provedení analýzy jsou výsledky automaticky odesílány do LIS a validovány laboratorním pracovníkem.

 

OSN-SStručný popis postupuOSN-E

1. primární zkumavku se vzorkem vložíme po centrifugaci do stojanu

2. stojan umístíme do analyzátoru

3. zmáčkneme tlačítko START na přístroji

 

OSN-SKalibrace a návaznost

Test APTT není kalibrován,je ověřen čas normální plazmy = při změně šarže změříme čas kontrolního materiálu

Dade Ci-Trol control level 1  

Výrobce/dodavatel: Siemens s.r.o., Evropská 873,664 42 Modřice 

Složení: lyofilizovaná lidská plazma,stabilizátor,buffer

Skladování: při +2°C až +8 °C

Stabilita: při +2°C až +8 °C do data exspirace,rekonstituovaná při +2°C až +8°C 16 hod., při +15°C až +25°C

              8 hodin

Příprava:lahvičku vytemperujte na laboratorní teplotu,přidejte 1 ml destilované vody a nechte 15 min.

              rekonstituovat,před použitím opatrně promíchat

Postup: 5 x změřit hodnotu APTT a vypočítat průměrnou hodnotu,primární data vytisknout,aktualizovat

            hodnotu normální plazmy v analyzátoru,změřit atestovanou kontrolní plazmu

            výsledky zapsatdo formuláře F-OKBH-80 a založit do složky u analyzátoru.

 

 

Charakteristika spolehlivosti:

Charakteristika spolehlivosti, specifické vlastnosti testu, srovnání metod viz aktuální aplikační listy pro

Pathromtin SL pro stanovení APTT na CS 2500.

 

Aktuální charakteristiky spolehlivosti:

Aktuální charakteristiky spolehlivosti jsou uvedeny v platném verifikačním protokolu APTT.

 

 

OSN-SDokumentace, zpracování dat a vydávání výsledků

Výsledky stanovení jsou uloženy v softwaru analyzátoru, záluhují se na server VTN.

Výsledky vyšetření v LIS se archivují v elektronické podobě.OSN-E

OSN-E Likvidace se řídí skartačním řádem.

Lékařům na odděleních a ambulancích Nemocnice Agel Ostrava-Vítkovice a.s. jsou výsledky vyšetření k dispozici elektronicky v NIS a v případě potřeby v tištěné podobě na příjmu OKBH.

 

Spolupracujícím lékařům jsou výsledky zasílány průběžně elektronicky a následující den doručovány v tištěné podobě se svozem biologického materiálu.

 

Výsledková zpráva obsahuje:

·        identifikaci laboratoře, která výsledek vydala

·        odkaz na akreditaci laboratoře

·        datum a čas vydání nálezu

·        jednoznačnou identifikaci pacienta

·        zdravotní pojišťovnu pacienta

·        identifikaci požadujícího subjektu (lokalizaci pacienta, je-li to vhodné)

·        identifikaci požadujícího lékaře (resp. oddělení)

·        diagnózu pacienta

·        druh biologického materiálu (sérum, plazma, moč, krev u vyšetření krevního obrazu)

·        jasně srozumitelnou identifikaci vyšetření

·        datum a čas přijetí vzorku laboratoří

·        datum a čas odběru vzorku

·        výsledek vyšetření s odpovídajícími jednotkami (nejčastěji SI jednotky)

·        označení akreditované metody

·        referenční intervaly vyšetření

·        interpretaci výsledků, je-li to nutné

·        jiné poznámky (např. kvalita nebo dostatečnost primárního vzorku, pokud tato může nežádoucím způsobem ovlivnit výsledek požadovaného vyšetření)

·        identifikaci osob, které výsledkovou zprávu kontrolovaly a schválily

·        zkratky identifikující žádanku

·         př. 20.BR-0777

·         20: den v měsíci, BR: biochemie rutina, 0777: číslo vzorku

·         př. 20.HH-0777

·         20: den v měsíci, HH: hematologie, 0777: číslo vzorku

Referenční a varovná rozmezí

Výsledky APTT jsou vydávány v sekundách a APTT-ratio.

 

Neléčení:  0D-28D:     aPTT-ratio  =  0,8  - 1,5

    1M – 1R:     aPTT-ratio  =  0,8  - 1,3

                1R – 11R:      aPTT-ratio  =  0,8  - 1,2

                11R-16R:       aPTT-ratio  =  0,8 -  1,3

                16R-150R:     aPTT-ratio  =  0,8 -  1,2

Léčení heparinem:       aPTT-ratio  =  2,0  - 4,0

 

OSN-SInterpretace výsledků, konzultační činnosti a hlášeníOSN-E

Klinické použití: APTT obecně se využívá při diagnóze koagulopatií s poruchou vnitřního koagulačního systému. Prodloužené časy dostáváme při poruchách faktorů vnitřního koagulačního systému (VIII, IX, XI a XII), u hemofilií, v přítomnosti látek s antitrombotickým účinkem (heparin). Menší citlivost je na jaterní choroby a na léčbu antagonisty K vitaminu.  APTT však nepostihuje faktory VII a XIII a jakékoli změny v počtu či kvalitě trombocytů. Tento test se též používá ke kontrole heparinové terapie.

Reagencie Pathromtin SL pro stanovení APTT je reagencií s vysokou citlivostí k faktorům vnitřní cesty (VIII, IX, XI a XII), heparinu i LA. 

 

 

OSN-SŘízení kvality:

IKK se provádí denně dle pracovní instrukce PI-OKBH-32 Provedení kontrol koagulace.

Variační koeficient analytického systému pro stejnou šarži kontrolní plazmy musí být menší než 5 %.

 

Externí kontrola kvality v rámci České republiky je organizována SEKK, laboratoř se jí účastní 2x ročně.

Poznámky:

Zkoagulovanou plazmu netestujeme.
U ikterických plazem je nutno mít na paměti jaterní poruchu a tím ovlivněné koagulační výsledky.
Zdroje chyb při získávání plazmy:

§  nadměrná venostáza před odběrem krve

§  odebraná krev obsahuje tkáňový tromboplastin (způsobeno chybnou venepunkcí)

§  intenzivní třepání krve s citrátem

§  faktor V je inaktivován dlouhodobým skladováním plazmy při teplotě místnosti

§  chybná centrifugační technika

§  přítomnost stromat erytrocytů, které vyvolávají koagulaci.

 

Jiné související informace

Pomocí APTT nelze monitorovat antikoagulační léčbu pomocí nízkomolekulárních heparinů.

LMWH a Rivaroxaban (Xarelto) mírně zvyšují APTT.

Podávání nízkomolekulárních heparinů (např. Fraxiparinne, Fragmin, Clexan) lze sledovat metodami založenými na stanovení aktivity anti-Xa.

Test může být ovlivněn nerovnováhou v poměrech aktivovaných faktorů a inhibitorů.

 

OSN-SLiteraturaOSN-E

SLP

Firemní příbalový leták k soupravě, aplikační listy.

Doporučení ČHS ČLS JEP Referenční meze pro koagulační stanovení u dětí a dospělých, 2018

Doporučení ČHS ČLS JEP Preanalytika v hematologické laboratoři, 2021

Ricos C, Alvarez V, Cava F, Garcia-Lario JV, Hernandez A, Jimenez CV, Minchinela J, Perich C, Simon M. "Current databases on biologic variation: pros, cons and progress." Scand J Clin Lab Invest 1999;59:491-500.2014

 

OSN-SAppendixyOSN-E

nevyplněno

 

OSN-SAutorské poznámkyOSN-E

nevyplněno

 

OSN-SRecenze, schváleníOSN-E

Autor: Mgr. Eva Miková